生物实验技术 » 讨论区 » 分析百问 » 质粒连接问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[未解决]质粒连接问题

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
老毒物[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 27188
精华 0
积分 305
帖子 139
信誉分 103
可用分 1108
专家分 36
阅读权限 255
注册 2009-9-15
状态 离线
1

发表于 2009-9-21 14:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

质粒连接问题

最近用puc19质粒进行双酶切连接用同样的酶进行双酶切的DNA片段后，进行转化，用AMP平板筛选，同时平板上也加了X-gal，IPTG，进行蓝白斑筛选。过夜培养后（12h-16h），平板上的菌落全是白斑，置4度冰箱1h后，也不见蓝斑，在挑取白斑菌落置于含AMP的LB进行液体培养8h，再提取质粒，进行电泳验证，最终提取出来的质粒和原puc19的质粒在一条线上，说明片段没有连接上去。那为什么怎么平板上都是白斑呢？
顶部
dean_cao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 26556
精华 0
积分 212
帖子 36
信誉分 100
可用分 784
专家分 27
阅读权限 255
注册 2009-8-31
状态 离线
2

发表于 2009-10-3 19:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有可能是您 双酶切 pUC19的那段片段 正好是pUC19 用来X-gal，IPTG 显色蓝斑的片段 所以导致 你即使没连上 也会出现全是白斑的现象
本帖最近评分记录
  • miracle   2009-10-3 20:10  专家分  +3   十分感谢您的帮助！中秋愉快！ ...
顶部