液相色谱

请教各位：
用的是C18柱，流动相，甲醇：0.01M KH2PO4(0.2% 三乙胺，稀磷酸调PH=2.5）=5：95。前一天在这个情况下还好好的，主峰8分钟出峰，今天再做3分钟就出峰了，流动相也重新配过了，还是这样。换其他的新柱子是8分钟出峰。请问一下是我用的体系有问题吗？为什么保留时间会差这么大？柱子还能用吗？

你看看柱压有没有明显的变化，用不加盐的大比例水冲柱子，再用甲醇冲，看你能不能让柱子恢复以前的保留。

一般来说，保留时间不稳定有以下几个原因：
1、泵输液不正常（压力波动、气泡等）；2、流动相组分变化；3、流动相缓冲能力不够；4、柱温的变化；5、柱子本身的问题，如被污染或未平衡好等。
从你这个情况判断，如果柱温没有变化的话，可能就是你开始用的柱子的问题，有可能被污染或没有平衡好等等。你可以多平衡一段时间看看情况。

主要的原因：是不是柱子中毒了，要是柱子中毒了，就会很快出峰的。那样的话这个柱子就不能有了。另外是不是流动相发生了改变，比如PH值，程序控制等。

你的柱效完了，我估计你的柱子酸性条件不是很合适，2.5的话对于C18柱相当酸了！
是不是峰型、理论塔板都不如以前了呢？
建议换换流动相，要不下个柱子还得完，
非得要用用完要及时冲洗出来！

1 甲醇的比例太低，需要平衡很长时间，8分钟的时候还没有平衡好。先用浓度比较大的甲醇冲柱子，再换到流动相里面，看看岀峰时间是否还是8分钟
2 甲醇很容易加多了活少了，多保留时间影响很大，最好用定量准确的容器加