样品前处理

仪器各组件

    泵 ：四元泵、二元泵

    在线脱气器

    进样器：自动进样器及手动进样器

    柱温箱

    检测器： DAD检测器、UV检测器

何时需要使用Agilent在线脱气机

    如果在低UV波长段，用最高灵敏度进行检测

    如果要求使用最佳进样精度

    如果要求保留时间重现性很高（在0.5ml/min流速以下）

    如果样品和检测对流动相中溶解氧敏感

开机

    打开计算机,进入Windows NT 或Windows 2000 画面,并运行Bootp Server程序（点击左下方【Bootp Server】图标）

    打开色谱仪各组件电源，待Bootp Server里显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。化学工作站自动与1100通讯。

排气

    将流动相放入溶剂瓶中，打开Purge 阀，依次单击【Pump】→【Set up Pump】，设Flow为2ml/min，单击OK ，再依次单击【Pump】→【control】，选中on，单击OK，则系统开始Purge至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。

    在【control】选项中选off，关闭泵，关闭Purge 阀。单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

    打开10％异丙醇溶液控制阀，用针筒抽吸至管路中有液体流出。调节控制阀松紧，控制流量至流出量约为每分钟5～15滴。

编辑分析方法

    新方法建立：点击【Method】，点击【Edit entire method】或【New method】选项，进行方法编缉。

    在Method Comments 中加入方法的信息如色谱条件、方法的用途等点击Ok进入下一画面



    泵参数设定：设定流速、比例、梯度、运行时间、平衡时间等。点击Ok进入下一画面

    自动进样器参数设定：设定进样量、洗瓶位置、进样方式等

    进样方式：“Standard Injection”只能输入进样体积“Injection with Needle Wash”可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针

    Use injector program：可以点击Edit 键进行进样程序编辑



    柱温箱参数设定：在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,选中“Same as left”使柱温箱的温度左右一致。点击Ok进入下一画面



    检测器参数设定－UV：在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“Peakwidth (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)，在Timetable 中可以Insert 一行输入随时间切换的波长。点击Ok进入下一画面



检测器参数设定－DAD

    样品波长--一般选择最大吸收处的波长

    样品带宽BW—一般选择最大吸收值一半处的整个宽度

    参比波长—一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域

    参比带宽BW—至少要与样品信号的带宽相等许多情况下用100nm作为缺省值

    Peak width Response time 其值尽可能接近要测的窄峰峰宽

    选中所用的灯点击Ok进入下一画面



方法保存

    单击Method 菜单选中Save method as 输入一方法名，如test

    单击Ok

    选择已有方法：点击【Method】，点击【Load method】选项，选取已存的各种操作方法。

样品分析与采集数据

    将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需澄清。

    待仪器显示Ready，基线平稳，从【Run control】菜单中选择【Run Method】，开始进样分析。或点击【Start】开始进样分析。

    数据处理：单击【View】菜单，单击【Data analysis】选项，进行数据分析。单击【View】菜单，单击【Method and Run control】选项，回到样品分析界面。

数据分析方法编辑

    从File 菜单选择Load signal 选中您的数据文件名

    单击Ok



积分

    从Integration 中选择“Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择Integration Events 选项选择合适的Slope sensitivity 、Peak width 、Area reject、 Height reject。

    从Integration 菜单中选择Integrate 选项则数据被积分

    如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止

    单击左边图标将积分参数存入方法

关机

    冲洗系统：反相柱用10％的甲醇水冲洗系统30分钟，再用100％甲醇冲洗系统20分钟，然后关泵，正相柱先用合适溶剂冲洗，后用柱保存液冲洗。

    退出工作站，关闭计算机。

    关闭10％异丙醇溶液控制阀。

    关闭仪器各组件

    关掉Agilent 1100电源开关