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标题:【讨论帖】western显影常见现象、原因及解决方案

TAT[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看来楼上很多对western很了解。我最近想做内质网内的蛋白质得联系，想跑凝胶电泳，但是怎样特异性地提取内质网中的蛋白质，不想提全蛋白，用全蛋白去跑电泳会很麻烦。。。不知道各位高人有没有好的方法？
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我前几次做的时候条带很好，最近几次做出来条带老怪怪的，内参都连在一起的而且两头高中间低，不知道是上样问题还是蛋白浓度太高~~~我上样量用了60ug
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okhaha[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，要是上样孔里面有胶对实验结果有什么影响呢？
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831226[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做出来的片子怎么白一块黑一块的，背景模糊呢，就像有脏东西
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
条带的一头黑，一头不黑，请教是不是就是前面所讲的转膜不均或者抗体孵育不均的问题?
转膜是半干转；
一抗孵育是封口袋内2-3ml抗体稀释液，santa一抗，1:800稀释，4°冰箱过夜；
二抗1:5000封口袋内摇床1h；
哪里有问题呢?请教。
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standbyme[使用道具]
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发表于 2013-4-5 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看见荧光曝5S就行了吧？比如内参我都是曝3S
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