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标题:【讨论帖】Western blot一抗的选择:单抗or多抗?

NBA[使用道具]
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我不是单从单抗与多抗的角度来选择抗体
而是看效果
多做比较
看实际检测结果等等
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moonlight45[使用道具]
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我不是单从单抗与多抗的角度来选择抗体
而是看效果
多做比较
看实际检测结果等等

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那这样的话,如果我作为新手,根据您的意思,是要各种抗体摸索过去吗?或者有没有一个普遍的结论,比如磷酸化蛋白的WB,用哪种抗体好,有具体明确的答案吗?比如我们做转化,有热击有电转,比较之后有个结论,电转效率高。
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mimili_901[使用道具]
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1.同一个牌子的应该单抗多抗价钱都差不多的吧,
2.我认为单抗特异性较强,灵敏性较低,多抗特异性较差,灵敏性稍高;和容易不容易做出来没关系吧,真能做出来的我认为单抗多抗都能做出来;单抗出不来,多抗出来了,那未必是你的目的啊;
3.高分文献里也有用多抗背景比较脏的图片,能说明问题就可以吧。
4.我个人倾向于能买到单抗就不要买多抗,我有3个指标只有多抗,做起来背景脏,条带多,对于选哪部分截图还需斟酌,封闭时间延长也还是看起来很脏不漂亮;单抗做出来就漂亮多了,就算弱也弱的舒坦利索的样子

以上个人粗浅之见,请高手们指正。
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yonger[使用道具]
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本人认为单抗要优于多抗,无论从时间,还是经济角度看,我们实验室均是单抗,老板拒绝多抗实验数据。
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yes4[使用道具]
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个人认为CST单抗好,尤其是兔单抗非常好,条带强,背景干净,一般不会有杂带,就算是磷酸化的蛋白也非常好出结果,而且每次稀释抗体的时候只要一点就够,也非常节省,所以非常推荐兔单抗
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windy+++[使用道具]
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做免疫印迹已经两年多,用过了各种各样的抗体包括多种国产抗体。总体来说单抗出现条带比较干净,多抗没见的比单抗容易出结果,况且多抗非常容易出现非特异性条带。不推荐使用多抗。如果根据经济条件的话,推荐使用最新被abcam收购的兔单抗公司的抗体,价格在2000左右,比较实惠,很好用;尤其不推荐santa cruz的抗体,不管是单抗还是多抗。磷酸化抗体必须是单抗的,CST是做磷酸化起家的,但是现在其他公司的磷酸化抗体也比较不错,兔单抗、abcam、invitrogen旗下的几个公司等等,看你的运气和选择了。选择多抗的话如果一开始做不出来结果还比较浪费,多抗摸浓度摸条件所浪费的金钱,我觉得比直接买单抗耗费的金钱少不了很多,所以比较推崇单抗。曾经申诉过CST公司的磷酸化ERK和NF-KB的抗体,给调剂换货了,还行。其他比较常用的抗体入内参抗体,选择国产的还比较靠谱,我们的actin就是中山金桥的,觉得还不错。总之,做western不推荐使用多抗,单抗比较好,western条件成熟,条带比较容易出结果。如果是做免疫组化的话,可以选择santa cruz的多抗,的确很有优势,其抗体量多,染出来的片子很好看,颜色挺重,比较推荐使用。
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wmp1234[使用道具]
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实验本来就是个探索摸索的过程,如果只是按照以前的做,也就不存在创新,只是重复而已。之前的工作的意义是在于我们参考,而不是复制。所以个人认为要具体问题具体分析。如果没有得选,那只能利用已有的。条件允许,还是要对比一下。如果用多克隆抗体能有单克隆抗体的效果就没有理由用单克隆抗体,反之亦然。还有一点要注意的是不见得单克隆就比多克隆好,单克隆特异性强的另一个含义即使你的样品里面有这个蛋白,如果没有单克隆抗体识别的决定簇,那么就会检测不到你的蛋白,从而得出错误结论。这是我试验得出的结论。
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是的,制备过抗体或者在抗体公司或者抗体行业做过的人可能会比较了解,好的抗体,不管单抗多抗,抗原占了百分之70的决定作用。不管多肽 小分子还是重组表达,拿到一个好的抗原,离好的抗体就很近了。有些指标可能多肽更加好,有些指标却必须是蛋白做抗原比较好,所以,很难一概而论。
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另外全世界做磷酸化抗体的公司包括cst phospho solution 等不超过5家,同理发现除了cst外的任何一个公司都有1000+磷酸化抗体种类,有心的人通过对比会发现,说明书其实都是一样的,如果论磷酸化抗体 abcam≈sigma≈novus≈abnova 等等
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831226[使用道具]
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应该根据最新的参考文献来决定吧。
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