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标题:【讨论帖】Western blot一抗的选择:单抗or多抗?

831226[使用道具]
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Bethyl是我个人心目中抗体质量最好的公司。我们的抗体基本都委托他们制备(新蛋白);有些后来转供abcam,因质量好供不应求。缺点:只有那些他们还没开发的抗体,可以委托制备;委托的费用很高。

一抗选择单抗or多抗是个“鸡肋”的问题。并不一定多抗就比单抗特异性差;并不一定单抗就比多抗效价低。
用什么抗体主要取决特异性和效价之间的平衡,以及实验的特点。
诸如WB,因为有跑胶分离,对抗体特异性要求就低。所以优先考虑也许特异性差但因效价高的多抗。
而原位杂交,诸如免疫荧光,Elisa等等由于不存在蛋白分离过程,尽管单抗效价低,信号弱,也只能优先考虑单抗。
但是,事物都有相反的一面。
WB时,如果选用的单抗(本身特异性就好)在目的条带区域,条带极其单一,那么即便效价低、信号弱,由于背景更低,可以通过提高一抗浓度使信号提高到符合需要的强度。
同理,免疫荧光时若采用多抗,往往是该多抗的特异效价比非特异信号高非常、非常多倍,那么可以改进一抗稀释液的配方,进一步削弱非特异性结合、同时通过曝光时间控制达到技术性去除非特异信号。
因此,讨论一抗选择单抗or多抗没有实际意义。
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redbutterfly[使用道具]
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Bethyl是我个人心目中抗体质量最好的公司。我们的抗体基本都委托他们制备(新蛋白);有些后来转供abcam,因质量好供不应求。缺点:只有那些他们还没开发的抗体,可以委托制备;委托的费用很高。

一抗选择单抗or多抗是个“鸡肋”的问题。并不一定多抗就比单抗特异性差;并不一定单抗就比多抗效价低。
用什么抗体主要取决特异性和效价之间的平衡,以及实验的特点。
诸如WB,因为有跑胶分离,对抗体特异性要求就低。所以优先考虑也许特异性差但因效价高的多抗。
而原位杂交,诸如免疫荧光,Elisa等等由于不存在蛋白分离过程,尽管单抗效价低,信号弱,也只能优先考虑单抗。
但是,事物都有相反的一面。
WB时,如果选用的单抗(本身特异性就好)在目的条带区域,条带极其单一,那么即便效价低、信号弱,由于背景更低,可以通过提高一抗浓度使信号提高到符合需要的强度。
同理,免疫荧光时若采用多抗,往往是该多抗的特异效价比非特异信号高非常、非常多倍,那么可以改进一抗稀释液的配方,进一步削弱非特异性结合、同时通过曝光时间控制达到技术性去除非特异信号。
因此,讨论一抗选择单抗or多抗没有实际意义。

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bethyl确实是个比较可靠的多抗公司,其实很多公司都有卖他们的产品的,bethyl的多抗,phospho-solution的磷酸化抗体都不错,invitrogen的磷酸化抗体清一色是phospho-solution的
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tianmei001[使用道具]
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你可以试试这种Western blot 多用途液,很好用的。可以帮你节省很多的宝贵时间。
cuturl('http://item.taobao.com/item.htm?spm=2013.1.0.106.XrMJhT&scm=1007.77.0.0&id=19395523424&pvid=8d8bb283-9e8d-41d4-b956-0316cfce5afd&ad_id=&am_id=&cm_id=&pm_id=')
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INK[使用道具]
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大家对多抗有误解,现在好的多抗一样非常特异

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呵呵是这样子的,我实验室单多抗也用不少,总体来看单抗多抗做出来的效果

选择性价比好的,不管单抗多抗,单抗结合位点单一,有可能做不出来,多抗结合位点多类,可能做出来有杂带,纯化效果好的也很好用的
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