小中大我的GST融合蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达, 我用6M 盐酸胍溶解包涵体后,上阳离子交换柱(我的目标蛋白用蛋白
软件预测等电点在9.2左右),所以我用了ph7.5的50mM 磷酸盐缓冲液作为start buffer, start buffer 里含有8M尿素, elution buffer
里也含8M尿素,还有1M NaCI, 但奇怪的是我的目标蛋白大部分随着 start buffer 给冲洗了下来(SDS-PAGE鉴定),很少挂到柱子上,
需注明的是我的盐酸胍溶解样是可以溶解在start buffer 里的, 并且在上柱前是用start buffer 稀释了5倍,并跳ph值到7.5.
小弟现在在做包涵体的纯化及复性! 想通过离子交换柱进行尿素浓度梯度复性,但必须得先让目标蛋白吸附到柱子填料上吧,
最近这个鬼复性把我给搞死了,迟迟拿不到我的目标蛋白。
望各位色谱高手给指点指点啊
还有希望做过蛋白复性的高人能多多交流交流!!!