小中大我做过一段时间，谈谈自己的经验（注：不同的蛋白采用的方法可能不尽相同，希望楼主尽量采用文献中已经使用过的方法）。
从细胞培养上清中提取分泌蛋白的首先一步是将上清中悬浮的细胞碎片等去除掉，通常使用低速离心法去除。我一般采用800g，4C，5min离心两次的方法去除，之后再以12000rpm,30min, 4C条件进一步去除，经过这些步骤，基本上细胞碎片是去除干净了（有文献还用0.22um滤膜再过滤一遍，我通常省略）。之后根据分泌蛋白的大小选择合适的Amicon ultra超滤离心管，离心管的分子量选择以小于分泌蛋白的1/3作为标准（分泌蛋白为50KD则选择10KD左右的管）。将上清液体加入超滤离心管中持续离心浓缩样品，根据需要选择浓缩倍数，我通常为80X。
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我是10ml细胞培养液上清超滤离心后剩下160ul，然后加了5X loading buffer，煮了10min，后凝固了，怎么回事啊？培养液是2%的血清的F-12培养液，求大神相助
