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标题:【分享帖】Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)

831226[使用道具]
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楼主! 我的问题是我的chip结果阴性对照也有阳性带! 而且重复了好几次,都有阳性带,郁闷!!!
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wood533[使用道具]
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我有一个问题想请教:就是CHIP里DNA纯化那一步用纯化柱的话,第一个BUFFER加进去后会有很多沉淀产生,这沉淀是什么呢?是SDS吗?可以直接离心丢掉吗?急盼回复,非常感谢。
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yychen[使用道具]
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哪位有做CHIP的cell lysis buffer 及nuclear lysis buffer的配方可否分享一份呢?
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TAT[使用道具]
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弱弱地提问一下:chip是只能做已知启动子与蛋白的结合吗?如果是转录因子与其他顺式元件结合的可以吗?后者的结合可能没有前者结合那么紧密,对实验的结果影响如何啊?如果不清楚启动子,后序的PCR该怎么做呢?急求解答啊,谢谢!
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98776langtao[使用道具]
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看了帖子获益良多啊!有些问题不是很清楚,还请高手指教啊:input对照的作用是什么?是不是所有的引物在input对照里都能P出条带?看帖子又说用抗体同源的血清做对照的,这个对照是不是阴性对照?用的时候加多少血清呢?
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utt0989[使用道具]
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想请教楼主抽提DNA后,是否需要将DNA调平后再做QPCR?还是直接等PCR结束后用Input来调整,可调整后IgG组也有一定的百分率,虽然相对抗体组为低,十分困惑!另外我用IgG来做阴性对照,Background总是很高。谢谢楼主指教!
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utt0989[使用道具]
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我查了一些对CHIP QPCR结果分析,发现有的方法根据每个样品的Input来进行调整,但这只是单个样本的结果,没有将IgG的background进行消除,另外的方法只是把将实验组与IgG组的Ct相减,又没有将Input的情况考虑进去。楼主有没有好的分析方法?苦闷中.......
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wmp1234[使用道具]
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请教一下chip可以反映组蛋白甲基化程度的原理是什么啊?请各位多多指教 非常感谢
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superboy[使用道具]
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谢谢LZ提供的宝贵资料。

我有2个问题想请教一下:
1、chip试验中60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA这个东西是干什么用的?只能用这个吗?
2、你提到TF和Promoter是生物意义上的结合,我想知道这个“生物意义上的结合”是什么样的一种结合方式,它与化学键的结合有什么区别?是指电子力吗?

多谢指教~

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你好:
1、Protein A琼脂糖和鲑精DNA混合物。鲑精DNA是用来封闭琼脂糖上面的非特异性结合位点,降低背景的。protein A 琼脂糖是结合和抗体之后,把蛋白-抗体复合物沉淀下来的。
2、我认为化学上的结合是有化学键的,比较稳定。生物学意义上的结合,其实就像“酶与底物”之间的结合一样,靠的比较紧而已。
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superboy[使用道具]
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非常感谢楼主。

我记得在哪看过,在交联DNA和蛋白质的时候,可以用甲醛,也可以用一种酶,我当时没留意,给忘了,好像两种方法所适合的范围不同,真遗憾,找了半天也没再查到。。。

还有个问题,可以用组织来进行CHIP吗?

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你好!
交联都是需要甲醛的。在甲醛的作用下,”蛋白-蛋白“,”蛋白-核酸(包括DNA和RNA)“之间会产生化学键。形成比较稳定的复合物。
随后的细胞破碎阶段,可以用超声破碎,也可以用一种酶(具体我也不记得了)。
组织也可以进行ChIP。只是交联的条件可能需要好好摸索下。
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