蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 188  10/19 |‹‹‹891011121314151617›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
91

发表于 2013-4-18 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近客户询问mPEG－MAL修饰后，产物不太稳定，大概几个小时PEG就脱落，国内国外修饰剂都是一样。

==============================================================================================================

应该查一下修饰剂的化学结构，有些PEG修饰剂的活性基团与聚合物之间的链不稳定。如用异型双功能试剂SMCC连接mPEG-NH2制备末端带有Mal的巯基专一性修饰剂，所用的SMCC在溶液中就不稳定！
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
92

发表于 2013-4-18 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，您能给出购买mPEG（Mw10kda与20kda）的具体信息吗？？现在nektar好像不卖了，多谢，在线等。

==============================================================================================================

不知您想买进口?还是国产?
如果进口的话,sunbio和NOF,价格200元/g左右;如果买国产的话,北京一有一家据说是代理英国的产品,我测过,二羟基含量5%.不过价格比sunbio和nOF便宜不少.
如果买修饰剂,当然找我就行了
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
93

发表于 2013-4-18 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该查一下修饰剂的化学结构，有些PEG修饰剂的活性基团与聚合物之间的链不稳定。如用异型双功能试剂SMCC连接mPEG-NH2制备末端带有Mal的巯基专一性修饰剂，所用的SMCC在溶液中就不稳定！

==========================================================

采用修饰剂是mPEG-MAL,大家可以讨论一下mPEG-MAL修饰cys的条件
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
94

发表于 2013-4-18 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该查一下修饰剂的化学结构，有些PEG修饰剂的活性基团与聚合物之间的链不稳定。如用异型双功能试剂SMCC连接mPEG-NH2制备末端带有Mal的巯基专一性修饰剂，所用的SMCC在溶液中就不稳定！

=====================================================

修饰剂是采用mPEG-MAL,马来酰基和PEG之间没有其它连接分子
顶部
韩梅梅[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72223
精华 1
积分 353
帖子 382
信誉分 102
可用分 2701
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-6
状态 离线
95

发表于 2013-4-18 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知您想买进口?还是国产?
如果进口的话,sunbio和NOF,价格200元/g左右;如果买国产的话,北京一有一家据说是代理英国的产品,我测过,二羟基含量5%.不过价格比sunbio和nOF便宜不少.
如果买修饰剂,当然找我就行了

=============================================================================================================

上次我问了一个朋友，上海生物制品研究所的，用的是凯正的PEG修饰剂，在大规模修饰吧，如果他们的能够报出来，你就多了一个大客户了

另外对园子的弟兄应该提供试用装，特别是新手，他们试用后有效果肯定找你了
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
96

发表于 2013-4-18 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PEG修饰剂的保存.
可以参考我上传的nektar目录.最近有些客户询问PEG开始时能修饰,可用过一段时间就不能修饰了.这主要是由于保存不当引起.特别是NHS活化的修饰剂如mPEG-SC,mPEG-SPA,mPEG-SBA以及mPEG2-NHS,由于这些修饰剂容易水解,所以从冰箱中取出后,应先放置到室温再开启瓶盖,以防止空气中水份冷凝潮解.
另外也可以根据自己需要分装一下,这样可以避免多次开启瓶盖,防止失效.
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
97

发表于 2013-4-18 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，您能给出购买mPEG（Mw10kda与20kda）的具体信息吗？？现在nektar好像不卖了，多谢，在线等。

======================================

不知您的mPEG买到了吗?是准备自己做修饰剂
顶部
popo520[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103468
精华 0
积分 269
帖子 257
信誉分 100
可用分 2066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
98

发表于 2013-4-18 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
国产的我没有用过，絮状沉淀是不是因为蛋白浓度高了？你是蛋白是纯化后测得么？我们这里好像没有出现这种情况

可能PEG修饰的热度过了，现在讨论的比较少，等我把PEG整个过程做完，我们开始抢Chromatography的生意，做蛋白纯化问题解答，哈哈

==============================================================================================================

最近做了个实验,如果采用lowry法测定,mPEG-OH会干扰测定,引起沉淀.各位也可以试一下,lowry试剂+mPEG会产生沉淀,所以如果残存PEG太多,会影响lowry法测定蛋白浓度结果
顶部
羊咩咩[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70437
精华 0
积分 320
帖子 360
信誉分 100
可用分 2556
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
99

发表于 2013-4-18 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

详细读了全篇，受益匪浅。
为了让更多的工程蛋白人获得上述信息，本贰拾面体转载到我们的网站的蛋白工程栏目了，如果有版权异议，请到我的网站跟贴声明，我一定尊重版权。
我的网站在百度搜索贰拾面体就到。谢谢。
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
100

发表于 2013-4-18 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近要做peg-ALD定点修饰N端了，对于反应条件请教一下各位老师？是不是蛋白与peg的比例越小，定点修饰的几率越大？
谢谢各位了！
顶部
 188  10/19 |‹‹‹891011121314151617›››|