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标题:【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

韩梅梅[使用道具]
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发表于 2013-4-18 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近要做peg-ALD定点修饰N端了，对于反应条件请教一下各位老师？是不是蛋白与peg的比例越小，定点修饰的几率越大？
谢谢各位了！！

===============================================================================================================

很少蛋白能拿到单点修饰产物，蛋白与PEG的比例需要进行条件摸索，在修饰率和单点修饰得率之间做个平衡，PEG太少，修饰率太低，很多蛋白你都浪费了
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发表于 2013-4-18 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近要做peg-ALD定点修饰N端了，对于反应条件请教一下各位老师？是不是蛋白与peg的比例越小，定点修饰的几率越大？
谢谢各位了！！

==============================================================================================================

一般的化,PEG-ALD修饰N末端,PEG:protein大概1:1~3:1,PEG修饰剂需要稍稍过量,这样尽可能使蛋白PEG化,因为毕竟蛋白比修饰剂贵得多.另外定点修饰和PEG比例没有关系,只取决于PEG修饰剂本身和蛋白.
PEG-ALD既可以和N端反应(当然N端必须有NH2,如果你的N端是Pro或其他二级氨,PEG-ALD是不能反应的),也可以与lys反应,通过控制pH值,调节lys与N末端的NH2质子化程度,选择性反应.
当然PEG-丁醛和PEG-ALD由于中间连接linker不同,活性可能有差别
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发表于 2013-4-18 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
原发性醛固酮增多症
关于PEG醛选择性修饰N末端中还原剂的问题:
文献中报道,PEG醛基偶联N末端采用氰基硼氢化钠还原胺化,由于氰基硼氢化钠的毒性,那麽能否用硼氢化钠代替?
采用氰基硼氢化钠可以将烯胺还原成烷基胺,而不还原醛;而采用硼氢化钠,醛基也会被还原,并且在酸性条件下,硼氢化钠不稳定.
一般PEG醛基偶联蛋白N末端是在弱酸性条件下,所以采用氰基硼氢化钠.
所以不能用硼氢化钠代替氰基硼氢化钠
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发表于 2013-4-18 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
希望大家相互交流,除了PEG修饰过程优化,分离与纯化,也希望能够交流PEG修饰蛋白的结构表征与分析
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发表于 2013-4-18 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
mPEG-丁醛修饰蛋白时，要加氰基硼氢化钠，好多文献说在室温下反应。
室温下蛋白特别容易降解，能不能在4度反应呢？
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发表于 2013-4-18 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 youyou99 于 2013-4-18 13:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
mPEG-丁醛修饰蛋白时，要加氰基硼氢化钠，好多文献说在室温下反应。
室温下蛋白特别容易降解，能不能在4度反应呢？

可以在4度反应.由于醛基和氨基反应比较慢,只是4度反应比室温反应会慢.
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发表于 2013-4-18 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
A蛋白多种修饰剂反应

===============================================================================================================

图中蛋白A与peg-5000反应物中，蛋白A上面的那条特浓的带是不是 单点修饰的？谢谢！！
初做peg-5000修饰，本来是单点修饰，但电泳后的分子量并不是目的蛋白的分子量与peg-5000的和，而是与popo老师的修饰图类似，怀疑是不是两个点修饰？
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发表于 2013-4-18 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 NBA 于 2013-4-18 13:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
A蛋白多种修饰剂反应

===============================================================================================================

图中蛋白A与peg-5000反应物中，蛋白A上面的那条特浓的带是不是 单点修饰 ...

由于PEG表面结合许多水分子,所以表观体积较大,当用电泳检测时,如果用蛋白做标准品,分子量会有很大偏差.
测定是单个修饰还是多修饰方法(1)MALDI-TOF测定分子量(2)多角度激光散射-UV-IR联用测定.(3)PEG分子量标准,PEG染色,SDS-PAGE
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发表于 2013-4-18 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近在做peg残留~头昏~HPLC-ELSD做过~电泳做过~都不太理想~请问各位大侠~具体点的实验方法~~^_^
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发表于 2013-4-18 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 王蜜蜜 于 2013-4-18 13:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

最近在做peg残留~头昏~HPLC-ELSD做过~电泳做过~都不太理想~请问各位大侠~具体点的实验方法~~^_^

说说为什麽采用HPLC-ELSD测定结果不理想?
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