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标题:【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

韩梅梅[使用道具]
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昨天过凝胶柱结果蛋白全挂柱子上了,郁闷!!各位大虾!!修饰后的蛋白过凝胶柱是不是经常会全挂在柱子上洗不下来?

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没有发现这种现象,缓冲液里有0.15M NaCl么?用分子筛很难分开修饰的和未修饰蛋白
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韩梅梅[使用道具]
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我的peg-丁醛是在贵公司买的,修饰率还不错,但会有多点修饰,我想请教一下,您说的(3)PEG分子量标准,PEG染色,SDS-PAGE,在哪里能买到?
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关于PEG染色,有专门文献.采用碘化钡,可以自己配置
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韩梅梅[使用道具]
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我的peg-丁醛是在贵公司买的,修饰率还不错,但会有多点修饰,我想请教一下,您说的(3)PEG分子量标准,PEG染色,SDS-PAGE,在哪里能买到?
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Staining Procedure
After electrophoresis the gel was soaked in a 5% glu-
taraldehyde (Merck) solution for 15 min at room tem-
perature for fixation. Afterward the gel was stained for
PEG as follows. First, the gel was put in 20 ml of perchlo-
ric acid (0.1 M) for 15 min, and then 5 ml of a 5% barium
chloride solution (Riedel de Haen) and 2 ml of a 0.1 M
iodine solution (Merck, Titrisol 9910) were added ac-
cording to the procedure described by Skoog (3).
ANALYTICAL BIOCHRMISTRY 200,244-248 (1992)
上传不了整个文件,只能将PEG染色部分摘录,另外醛基修饰产生多修饰,你可以将修饰缓冲液pH降低
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ququer787[使用道具]
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昨天过凝胶柱结果蛋白全挂柱子上了,郁闷!!各位大虾!!修饰后的蛋白过凝胶柱是不是经常会全挂在柱子上洗不下来?

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我们一般用凝胶色谱SE-HPLC监测反应,常用TSK 3000或GF250柱,流动相PBS,还没有发现你出现的问题.
制备分离一般采用SP介质离子交换
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ququer787[使用道具]
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窄分布PEG标准品,许多卖凝胶色谱仪器厂家都有销售,但是比较贵;你可以利用PEG如PEG5K,PEG10K,PEG20KD等做标准,PEG染色做粗略估计修饰几个PEG.
最好是得到纯化产品用maldi-TOF测定分子量.
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wawa[使用道具]
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看到大家讨论的这么热闹,真好!我没有接触过PEG修饰蛋白的问题,但很感兴趣。
实在不好意思,有一个弱弱的问题想问一下。
读了以上的内容,但除了这一句
“将活化的聚乙二醇与蛋白质分子相偶联,影响蛋白质的空间结构,最终导致蛋白质各种生物化学性质的改变:化学稳定性增加,抵抗蛋白酶水解的能力提高,免疫原性和毒性降低或消失,体内半衰期延长,血浆清除率降低等。”
好像没有关于PEG修饰蛋白的目的的介绍了。有没有哪位老师可以介绍一下,PEG修饰的目的、作用、研究方向什么的。
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purrr[使用道具]
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求助:
我要用MAL-PEG-NHS修饰一段10个氨基酸残基的寡肽,主要反应是NHS基团与肽上的NH2基团反应,把PEG 联到肽上,但不知具体的的反应条件,故想请教一下,谢谢!
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剪刀手520[使用道具]
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虽然我不做蛋白质的PEG化,但是仍然受益匪浅,这里想问一下有人做过如何使一段DNAPEG化吗?谢谢!
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mysmdbl[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 剪刀手520 于 2013-4-18 13:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

虽然我不做蛋白质的PEG化,但是仍然受益匪浅,这里想问一下有人做过如何使一段DNAPEG化吗?谢谢!

文献
Polymer-conjugated Bioactive
Oligonucleotides
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birdfish[使用道具]
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我现在做的课题是蛋白质修饰方面的,不过不是使用PEG,而是表面功能化的无机纳米材料,材料用琥珀酰碳酸酯表面功能化了。我觉得我做的课题和PEG修饰蛋白有很多共同点,所以也了解了一部分这方面的内容。现在的问题是我只是把我们的材料和牛血清白蛋白(tiicine缓冲溶液)混合,然后紫外检测280nm又没有峰,已确定材料是否和蛋白相结合,以后怎么进展实验我现在一点头绪都没有,请大家指点一下,谢谢了!
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