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标题:【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

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发表于 2013-4-18 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以试一试,不过铁硫氰酸氨在水和氯仿相平衡很慢,这种方法我们专门做过,工作曲线线性不是太好,重现性差一些.
祝你成功!

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蛋白遇氯仿沉淀，导致结合的PEG无法进入氯仿相，此法有待改进
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popo520[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白遇氯仿沉淀，导致结合的PEG无法进入氯仿相，此法有待改进

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没错,所以我说要将PEG脱落下来
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羊咩咩[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没错,所以我说要将PEG脱落下来

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用酶切？
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ending[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们做过酶切,酸解,碱解都可以,所以铁硫氰酸氨方法实际并不简单
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发表于 2013-4-18 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们做过酶切,酸解,碱解都可以,所以铁硫氰酸氨方法实际并不简单

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TNBS法有没有具体的操作过程？在反应后如何计算修饰度？有的文献报道的是吸光度比浓度的斜率比较，我这边做了下，发现结果不是预期的那样，而且不同的波长，相差比较大。
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近，许多咨询mPEG－OH的活性与端基取代度有何不同？
mPEG－OH端基取代度表明的是聚乙二醇末端OH被取代的程度，端基取代率高，不一定所需要的活性高，因为羟基可能被其它基团取代。
而PEG修饰剂活性是官能团的活性。这个指标才是反映修饰剂反应活性的真正指标。
所以购买PEG修饰剂时要区分两个指标
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abc816[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近做了个实验,如果采用lowry法测定,mPEG-OH会干扰测定,引起沉淀.各位也可以试一下,lowry试剂+mPEG会产生沉淀,所以如果残存PEG太多,会影响lowry法测定蛋白浓度结果

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如果没有残留的MPEG，PEG-protein中的PEG也一样会影响他的结果吧！在LOWRY中！
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summerxx[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有残留mPEG，mPEG－protein中的PEG在lowry法测定浓度范围内，不会引起沉淀，至于是否影响蛋白浓度测定，待研究后告诉大家
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用LOWRY测定PEG化蛋白质的浓度是有一定干扰的,PEG分子量越大,结果误差越大,用BCA测定的结果倒是和280nm结果相符.

另外,请问JFYAN兄,贵公司有没有专门用于C-末端羧基修饰的活化PEG?
mPEG-male修饰的产物真的不稳定吗?
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bling[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

专利中说mPEG－MAL在高pH条件下会开环

欢迎大家来讨论啊
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