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标题:【讨论帖】蛋白质PEG化修饰与纯化

fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bling 于 2013-4-18 15:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

专利中说mPEG－MAL在高pH条件下会开环

欢迎大家来讨论啊

请问下有人做过MAL修饰吗？
不稳定？
是mPEG与MAL之间的键还是 MAL与蛋白之间的键不稳定啊？
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qiangren789[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是马来酰亚胺的环打开，既不是mPEG与MAL之间的键也不是MAL与蛋白之间
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦哦哦
我的化学知识很差
不知道这里的几个键谁稳定
哪在什么条件下稳定呢？温度，ph值？

还有我想问下：
如果一个PEG40000-protein与游离的PEG40000的在C18反相条件下能分开么？
protein分子量4000左右
现在公司还没有ELSD
真郁闷哦
有没有别的办法啊？
什么柱子合适啊？
大哥能推荐一下么？
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪位高手能解释一下，PEG与寡肽反应时，为什么有时寡肽需要保护，有时候又不用呢。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪位高手能解释一下，PEG与寡肽反应时，为什么有时寡肽需要保护，有时候又不用呢。

==============================================

你问题说的不是很清楚
其中我认为和你寡肽所处的环境有关，
1.你的寡肽样品提供的每次不一样（活性残基状态不一样）
2.你的寡肽在你保存的环境不稳定
3.你的PEG活性不稳定（主要不知道你用的什么衍生物）
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DDD[使用道具]
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发表于 2013-4-18 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好多朋友又在询问PEG取代度和官能团活性差别？
PEG取代度一般采用核磁共振NMR的方法测定，主要是检测残存的mPEG－OH中羟基的残存量（通过计算OH与CH3的比例得到取代度）；而PEG修饰剂官能团的活性代表的是真正的反应活性，比如mPEG－ALD中是醛基的含量，mPEG－MAL中是能与SH反应马来酰基含量。
如果mPEG－OH的端基被其他基团取代，而不是你所需要的官能团，取代度也会很高，但活性不高。
所以真正能够反映PEG修饰剂性质的应该是官能团活性，而不是端基取代度。
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发表于 2013-4-18 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，受益匪浅了。这些问题也是苦恼我的，ge的那个macro sp 实在是太贵了，用普通的sp纯化，peg修饰后蛋白载量降低的太多。定点的修饰倒好（其实所谓定点修饰，并不是完全依赖peg，有一句话，叫case by case,peg-ald是最早被成为定点修饰的，与N末端形成烷基键。其他的都基本是形成个酰胺健，如sc，nhs等等，其实对于这种peg，控制反应ph，使亲核位点质子化或去质子化，都可以使修饰位点的比例发生偏移，有几篇文献就是通过控制反应ph来达到获取同分异构体的目的，进而进行测定先灵的peg-intron就是冻干粉的，说明这个his上的酰胺健是容易水解的，反过来说就是容易被去质子化，低ph下即暴露出亲核位点。而lys的N原子则要高ph才能去质子化。）

另外，修饰蛋白的均质性（老外叫homogenity）也是影响纯化的一个主要原因，我曾做过天然蛋白，分泌性蛋白，包涵体蛋白的peg修饰，剔除修饰位点的影响，总的感觉是一个比一个难以纯化。（呵呵，一家之言，有共同感觉的筒子们希望能和我说说）

fsdd817兄弟的话很有道理，介质载量是影响纯化的主要原因。一般的Q-SEPHOROSE及sp吸附peg-protein载量太小。macro sp说明书上说了一句话很好：当与peg-protein结合的配基少的时候，在loading的过程中，unpeg-protein会交换peg-protein，这样一来，整个层析过程就更加复杂。

对应macro sp这个介质的，有个叫ceramic Q HYPER D的介质，好想现在也不生产了，先灵的peg-intron就是用这个纯化的。他的说明书我也看过，叫gel in shell。。可惜没用过。。

帖子回的比较凌乱，正如我对peg修饰蛋白纯化的认识。希望和大家多多交流，能理顺，归纳，总结。
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avi317[使用道具]
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发表于 2013-4-18 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. Obstacles and pitfalls in the PEGylation of therapeutic proteins

V. Gaberc-Porekar, I. Zore, B. Podobnik, V. Menart.

Curr. Opin. Drug Discov. Dev., 2008,11:242–250.

cuturl('http://www.biomedcentral.com/render/render.asp?arx_id=cd-877276&type=pdf&access=denied')

2. PEGylation: an approach for drug delivery. A review.

Jain A, Jain SK.

Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2008;25(5):403-47. Review.

cuturl('http://dl.begellhouse.com/journals/3667c4ae6e8fd136'),5c6300a248a5f5e1,171be91337221ac9.html

3. The impact of PEGylation on biological therapies

Veronese FM, Mero A.

BioDrugs. 2008;22(5):315-29. Review.

cuturl('http://chinesesites.library.ingentaconnect.com/content/adis/bio/2008/00000022/00000005/art00004#avail')

4. Emerging PEGylated drugs

Kang JS, Deluca PP, Lee KC.

Expert Opin Emerg Drugs. 2009 May 20.

cuturl('http://www.informapharmascience.com/doi/abs/10.1517/14728210902907847?cookieSet=1&journalCode=emd')

5. PEG-modified ***aceuticals

Bailon P, Won CY.

Expert Opin Drug Deliv. 2009 Jan;6(1):1-16. Review.

cuturl('http://www.informapharmascience.com/doi/abs/10.1517/17425240802650568')

6. Advances in PEGylation of important biotech molecules: delivery aspects

Ryan SM, Mantovani G, Wang X, Haddleton DM, Brayden DJ.

Expert Opin Drug Deliv. 2008 Apr;5(4):371-83. Review.

cuturl('http://www.informapharmascience.com/doi/abs/10.1517/17425247.5.4.371')
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-18 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正在准备做多肽的PEG修饰，从头看到尾了，发现最近上来讨论的战友很少了，这是一个很好的帖子，希望大家不要让他下沉了。
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is2011[使用道具]
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 小中大

正在准备做多肽的PEG修饰，从头看到尾了，发现最近上来讨论的战友很少了，这是一个很好的帖子，希望大家不要让他下沉了。
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