蛋白质与蛋白组学

请问下有人做过MAL修饰吗？
不稳定？
是mPEG与MAL之间的键还是 MAL与蛋白之间的键不稳定啊？

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mPEG－MAL与游离SH反应在pH6.5～7.5形成稳定的硫醚键，在pH>7.5时，会与NH2反应，并且发生马来酰基水解反应，在PH7时MAL与SH是NH2的1000倍.

这些问题也是苦恼我的，ge的那个macro sp 实在是太贵了，用普通的sp纯化，peg修饰后蛋白载量降低的太多。定点的修饰倒好（其实所谓定点修饰，并不是完全依赖peg，有一句话，叫case by case,peg-ald是最早被成为定点修饰的，与N末端形成烷基键。其他的都基本是形成个酰胺健，如sc，nhs等等，其实对于这种peg，控制反应ph，使亲核位点质子化或去质子化，都可以使修饰位点的比例发生偏移，有几篇文献就是通过控制反应ph来达到获取同分异构体的目的，进而进行测定先灵的peg-intron就是冻干粉的，说明这个his上的酰胺健是容易水解的，反过来说就是容易被去质子化，低ph下即暴露出亲核位点。而lys的N原子则要高ph才能去质子化。）

另外，修饰蛋白的均质性（老外叫homogenity）也是影响纯化的一个主要原因，我曾做过天然蛋白，分泌性蛋白，包涵体蛋白的peg修饰，剔除修饰位点的影响，总的感觉是一个比一个难以纯化。（呵呵，一家之言，有共同感觉的筒子们希望能和我说说）

gehealth兄弟的话很有道理，介质载量是影响纯化的主要原因。一般的Q-SEPHOROSE及sp吸附peg-protein载量太小。macro sp说明书上说了一句话很好：当与peg-protein结合的配基少的时候，在loading的过程中，unpeg-protein会交换peg-protein，这样一来，整个层析过程就更加复杂。

对应macro sp这个介质的，有个叫ceramic Q HYPER D的介质，好想现在也不生产了，先灵的peg-intron就是用这个纯化的。他的说明书我也看过，叫gel in shell。。可惜没用过。。

帖子回的比较凌乱，正如我对peg修饰蛋白纯化的认识。希望和大家多多交流，能理顺，归纳，总结。

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macro sp这个填料也不见得有多好用。流速慢，不耐压。对工业放大不利。
PEG蛋白的纯化，主要和蛋白性质有关，不能一概而论。理论看来看去是那样，做起来没那么简单。