蛋白质与蛋白组学

国产的我没有用过，絮状沉淀是不是因为蛋白浓度高了？你是蛋白是纯化后测得么？我们这里好像没有出现这种情况

可能PEG修饰的热度过了，现在讨论的比较少，等我把PEG整个过程做完，我们开始抢Chromatography的生意，做蛋白纯化问题解答，哈哈

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没有，蛋白的浓度很低的，做过比较，只有含PEG的才有沉淀物，且只在LOWRY中有。
呵呵强GE的生意，呵呵呵呵、、、、
那也只能抢PEG-Protein分离这一快的吧。
但从精神上我强烈的支持你，
现在GE公司的产品价格高的离谱

呵呵，我们测的是纯化后的样品，方法应该不会错的，我们用过这种方法测过其他的蛋白没事，不知道是PEG试剂的问题么？你们是进口试剂吧，我们用的是国产的，而且两中方法测的结果相差很大。

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也有可能，你用Lowry法单独检测过国产的PEG

从前面CM纯化两种不同的PEG修饰蛋白来看，PEG修饰后，PEG屏蔽作用对蛋白的电荷影响最大，不管是酸性蛋白还是碱性蛋白，CM的结果都是多点先下来，因为屏蔽得多，接着是单点，屏蔽少些，还有些电荷与CM介质作用，最后是未修饰蛋白，很多电荷与CM介质结合。这里的等电点聚焦的结果也是这样的，PEG修饰后，蛋白等电点靠近中性

（1）纯化A的缓冲液确实是4.0左右，CM 工作pH6-10但可以在pH4-13可以长期保存的，我们做下来没什么关系
（2）平衡这三者之间只有多选择几种修试剂，纯化以后看活性保留力，体内半衰期等后期工作了，如果是做药的话，PEG修饰，主要是在修饰剂的选择上面
（3）计算修饰率，一是通过SDS-PAGE，扫描初步看看，真是确定是在纯化后的，纯化以后测单点修饰产物浓度的，有点不准确，偏低

多讨论

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> 如您所言，Pegylation现在真的是有点过热，这可能与它的市场前景也有关。但修饰后产物的分离纯化确有难度，希望韩梅梅老师能够深入的讲下去。
>
> 有几个问题想请教：
> （1）您的Protein A的PI=5.20,选用CM Sepharose FF的话，pH应该选的是4.0左右吧，但好像CM的工作范围是6－10，超出此范围影响大吗？看您的纯化结果蛮好的，影响应该不大，那该工艺对树脂的损伤大吗？树脂可重复用多少次？
> （2）Protein A选用mPEG-SPA20000是不是由于电泳上可见未修饰的蛋白量变少了，但用这么大分子量的PEG修饰势必对蛋白活力影响更大，您是怎么平衡活力、PEG分子量以及修饰率之间的关系的。
> (3) 您是怎样计算修饰率的？
>
> 谢谢