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标题:[未解决]为什么DTT不能将二硫键全部还原

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紫菁[使用道具]
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发表于 2009-11-23 19:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 紫菁 为MSN好友 通过MSN和 紫菁 交谈

 小中大

为什么DTT不能将二硫键全部还原

我的蛋白为RNases，表达在包涵体中，理论上有4对二硫键，8个游离巯基。我把包涵体溶在8M脲中，然后加入5mMDTT，还原过夜。然后用AEMTS终浓度100mM烷化1h做MALDI-TOF。结果显示烷化上了6个游离巯基。请问是烷化条件不够还是DTT没有将包涵体的二硫键全部还原？还是蛋白本身构象问题使一个二硫键埋在内部，DTT作用不到？急，求救！
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  • miracle   2009-11-23 21:32  可用分  +1   已有热心朋友回复 请您及时回应 ...
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发表于 2009-11-23 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 紫菁 的帖子

先将蛋白质变性再还原看看。
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发表于 2009-11-24 08:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 紫菁 为MSN好友 通过MSN和 紫菁 交谈

 小中大
我已经变性了啊，溶在8M脲中不就是变性吗？
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发表于 2010-6-25 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你先看看你的二流键是不是已经打开了，如果打开的话,没有保护的话,回被氧化的，也就是你的的蛋白回多加32DA.这样可以判断问题出在那里,有可能是烷化剂没有反映上
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