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标题:【讨论帖】最近做原核表达的几点教训和体会

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2013-4-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有包涵体表达纯化的贴？变性，复性，纯化相关内容的
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2013-4-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近一直在做原核表达，不过没有结果，很郁闷！今天看到大家的精彩讨论，受益匪浅，好像找到我的蛋白没有表达的原因啦！谢谢大家！
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2013-4-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看到文献说，如果表达毒性蛋白，特别是可以水解细胞壁的蛋白，可以低温（4度冰箱）放置，即加IPTG诱导大约2小时后冰箱放置过夜。不知有没有做过相似实验的战友啊？
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plaa[使用道具]
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发表于 2013-4-20 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我最近也在做原核表达，实验的重复性很差，很头疼，想楼主把自己做原核表达的详细步骤给我讲一下。我用的是PET30载体和BL21感受态细胞。谢谢！
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plaa[使用道具]
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发表于 2013-4-20 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直在做一种毒性蛋白的表达，构建的质粒经测序是正确的，在BL21,rosetta,C43中都没有表达。是不是与载体也有关系呢？
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