小中大很高兴一起讨论。同意您提出的阴性对照问题。谢谢！
关于前面的问题，
1. 我用的是DYT培养基，比LB中的tryptone含量高一倍。
2. BL21 Star DE3是一种优化的表达菌株，invitrogen网站上有一张图片，用该菌株做表达，产量要高于未突变的DE3，因为前者是某（些）蛋白降解酶的突变菌株。
3. T7 promoter 具有很强的可诱导性。在表达毒性蛋白的时候常用到glucose或者pLysE 菌株。前者抑制蛋白的本底表达；后者能产生一种酶使得在T7 promoter控制下的基因表达得到抑制。这些都是因为培养基能诱导一些本底表达。
所以，您用的是什么菌株呢？表达量跟菌株，外源片段，加IPTG的时间等等都有关系。从图上您可以看到，我这个蛋白的表达是非常高的。除了加入的lysozyme （14k 左右的那条带），目的蛋白在总蛋白中的量恐怕要达到80％了。所以微量的lactose很有可能诱导出较多的蛋白。
关于漏样的问题。胶上有说明，18 wells，30 ul。我都是点10 ul样。另外，同样的操作，在第三张胶图中看不到漏样的现象。(可以比较positive control旁边的带）。
Anyway，我的这个结论缺乏直接的证据。所以我用的描述是”培养基确实很可能存在lactose，而且应该是造成阴性对照表达的原因“。
要证明这个问题，可以用不含tryptone的培养基，比如Minimal培养基和DYT做个对比。这样也能说明问题。也许等下次做蛋白表达的时候会考虑做一个，到时候再把结果贴上来
再次感谢您的讨论。
