【讨论帖】蛋白芯片制作与应用 - 经验共享

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标题:【讨论帖】蛋白芯片制作与应用

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发表于 2013-4-20 15:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 NBA 于 2013-4-20 15:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

摘眼或尾静脉放血，37度静置2小时，4度放置过夜，2000rpm室温离心10分钟收集血清，加0.01%硫柳汞，-70冰箱长期保存。

真的很感谢NBA老师的无私帮助！再加问一句，0.01%的硫柳汞应该加多少，或者以怎样的比例加入血清中？再次感谢！

子衿青青[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

或者0.01%硫柳汞是终浓度吗?

8s5g[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教大侠：
我们实验室想做蛋白表达差异性分析。就某一基因沉默后对肿瘤细胞分泌蛋白产生的影响。现在不能预知会产生什么样的蛋白差异性。想用SELDI-TOF-MS分析肿瘤细胞上清液不知是否可取？另外需将蛋白样品送到外地，怎样保存？如果是细胞内蛋白如何检验其提取的是否成功？
我是个菜鸟级的问题比较多，希望各位帮忙啊！！！
谢谢啦！

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发表于 2013-4-20 16:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

或者0.01%硫柳汞是终浓度吗?

=============

使用终浓度

queen[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白芯片是我们今年刚申请的课题，之前没有人做过，我也是刚接触，希望大家多多指教哈
那两篇文章：Microarray on the slide .
Solid supports for microarray immunoassays.
我下不下来，劳烦能不能帮我发到邮箱啊，我邮箱是xiaolixu1983@gmail.com
多谢啦！

newway[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

以前也做过双向电泳，但是结果不太好，后来就不敢再尝试了，也没有往下作。
但是看了上面这些讨论，收获很多，对今后的工作很有帮助，对双向电泳的分析方法又有了信心。虽然过去的实验经历可以总结一些教训，但还是很有益处的。

想请教斑竹和各位老师，双向电泳中对蛋白的pH和分子量估计意义大么？用什么方法染色有利于进一步的质谱分析？（既获得蛋白高检测率又不影响后面质谱分析）。质谱分析国内哪家做得好？

jujuba[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教，我打算做抗体芯片，检测病毒，但是把单抗点到芯片上后确不能和病毒结合，检测不到信号，是不是点样过程中，单抗的功能结构被破坏了啊，谢谢！

KGZ564[使用道具]
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发表于 2013-4-20 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人觉得原因可能有以下几点：

单抗本身有问题
单抗可能在点样的过程失活
点样在片基（载体）上的单抗可能在缓冲液洗涤的过程中被冲洗走了，损失了很多

如果能把试验过程介绍稍详细点就好让大家帮助你了。

阿凡提[使用道具]
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