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标题:【讨论帖】western 内参选择

greenbee[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问高手，膜蛋白用什么内参呢？
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plaa[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那位仁兄豪姐知道 GATA-4蛋白的分子量？？？谢谢帮助
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关于内参的应用问题，国内一直还没有形成应用的习惯，可能是有研究水平的原因，也有可能是内参的抗体大部分是国外产的，超级贵！前段时间为了一篇文章，用的内参外国人老不相信，老板一狠心买了两只chemicon内参，50ug包装，每支3000多！不过好在我们有自己做的一支很好用的内参单抗，平常的实验可以保证敞开用，国内其他大部分实验室可能就没这么好的运气了！但是老板经过此事也下决心要把这个抗体完整详细的鉴定出来，然后推出去让大家都来用提高它的可信度。目前，鉴定的工作已经差不多完成了，剩下的就是申请专利，不管最后是怎么卖出去，国产的东西应该会大大便宜于国外的，这对大家来说可能也算一个好消息吧

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内参单抗还可以申请专利？？
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发表于 2013-4-23 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问高手，膜蛋白用什么内参呢？

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试试脂筏蛋白flotillin
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yes4[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的内参是GAPDH，

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你好，请问你的GAPDH一抗和二抗的浓度为多少？我一直没做出来这个
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位高手，我的一抗是160KD的，选用β-actin可以么?
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okhaha[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位大侠：我做大鼠肝脏pxr（50-52kDr）的westren，actin做内参，加目标蛋白一抗二抗没有加内参一抗二抗去曝光显影的话，目标蛋白条带可以出来，加了actin一抗二抗去曝光，一样的时间，就只有内参的条带，没有目标条带，延长曝光显影时间，还是只有actin条带，很神奇啊。是不是actin一抗二抗影响目标蛋白的发光显影啊。
各位做过的有没有见过这种现象啊，到底会是什么原因呢？麻烦各位给分析一下。
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发表于 2013-4-23 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提取细胞subfraction的蛋白，有胞浆蛋白，核内可溶蛋白，染色质结合蛋白，胞膜蛋白，细胞骨架蛋白，分别应选用什么做内参？谢谢
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位高手 我做小鼠海马组织的突触囊泡素蛋白 用什么内参比较好啊
我用了TUBULIN 在上样量一定的情况下 为什么内参出来的条带有深有浅，差别还有点大呢？是提蛋白的原因吗？请高手指教，谢谢啦
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我之前做的是大鼠的左心室组织，内参用的是abcam 的beta-actin， 一直都觉得没有问题。现在做小鼠，换了cellsignalling 的，好像问题出来了。
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