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标题:【讨论帖】western 内参选择

abc816[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果要做blotting的蛋白是膜蛋白，所提取的蛋白样品也是膜蛋白，那么应该选择什么作为内参呢？
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911[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做人大肠的一抗14.4kd。用北京博奥森的β-actin内参，出现两条带，请各位帮忙分析一下，谢谢
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

近日，用血清样品做westernblot，内参选用的是GAPDH，做了两次，内参条带均未出现，不知为何？是不是GAPDH不会进入血清中？请有经验者指教，谢谢！
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mysmdbl[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想在细胞培养上清液中作wb。请问用什么做内参？
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junhun[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，我也是做培养液上清中蛋白的wb,请问用什么做内参啊，非常急，谢谢大家，帮帮忙
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位大神，我做的是 牛奶中的乳铁蛋白 请问做wb的时候用什么做内参？ 新手求教~
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，看到楼楼们的讨论，颇有感触，我用b-actin先后做大鼠的脑组织，肝、胃均出带，做空肠、回肠、胰腺时条带缺失，部分出，部分不出，做骨骼肌几乎不显，查阅说明书，才知心肌、骨骼肌是不能用b-actin做内参的，空肠因我是每组5个样本，其中前三个都出，后俩不显，查阅园子里的帖子，其中有位告知说空肠是平滑肌，b-actin不显，看了此专题讨论贴，顶一下，学习中。。弱弱的还想问下，若是做骨骼肌的，应该选取什么为内参合适，另外，骨骼肌蛋白的提取方法有过来人知道否？谢谢指导！
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hold住[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位大侠，严格意义上讲，每次western-blot都应该有内参，不然怎么能保证上样量相同。没有标准，没有参考谈何高低？本来就是半定量，再失去参考，误差就太大了。我现在国外johns hopkins hospital,每次做都加内参，的确发现几次上样误差很大。
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nn255[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个标记一个，看看，我想选择哪种内参是否可以看看与自己要做的组织或细胞已发表的文献来作为依据之一。
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gogo[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位好，我是新手，正准备做western，不过测的是人血浆中的某种蛋白，分子量30KD左右，看过一些文章，但提到的标本都是组织或细胞，没有涉及血浆的，不知道要选什么内参合适，请教各位了，急需，谢谢!
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