蛋白质与蛋白组学

各位高手,我做的是狗的GLUT-4蛋白,很多论文都没用内参,我问了中衫,说没的狗的内参,急死我了,请高手提示在那里能找到?

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我也帮你搜索了一下，确实没有看到有抗狗的GLUT-4的抗体，也没有看到与狗有交叉反应的抗体，sorry。但是仍然有如下的几个方法可以试试：
1. 搜索文献，看看有没有类似的引用，这个你手里的文献可能比较多一些；
2. 抗体搜索，找到几乎所有公司的关于GLUT-4的抗体，再分析这些抗体的表位
cuturl('http://www.biocompare.com/matrix.asp?catid=3194&scid=2&s=Glut4&type=6'),69120
在NCBI上比对狗的GLUT-4的氨基酸序列与人类的差异（或者说同源性），然后看抗体针对的表位是否保守，如果这段序列正好一样或者保守，那么再没有其他选择的情况下，可以试试这些抗体的。祝好运！

你的问题我也同样遇到了，我做的是组织，提取的心肌组织的蛋白做的WB，现在发现正常大鼠的心肌组织beta-actin的条带非常浅，而病变模型的beta-actin条带很明显，开始觉得可能是自己蛋白测定或稀释的时候有问题（虽然自己觉得这种可能性很小），但是还是跑了此普通的蛋白电泳来验证自己的上样量，在普通蛋白电泳图上显示我的蛋白上样量是一致的。那现在说明beta-actin确实在病变的组织中表达量发生变化了，既然这样为什么beta-actin还能作为一个看家基因呢？是不是用GAPDH会好些？如果beta-actin、GAPDH、tublin在某种病变的组织中均发生较大改变了（这种情况有可能，虽然几率很小），那该如何选择内参呢？请教各位在行的朋友，谢谢

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这是我做的一张小鼠组织的bata-actin Western图，除心肌和骨骼肌外，在其他组织中均能检测到目的条带，平滑肌没有做。这表明我的抗体本身没有问题。

你的问题我也同样遇到了，我做的是组织，提取的心肌组织的蛋白做的WB，现在发现正常大鼠的心肌组织beta-actin的条带非常浅，而病变模型的beta-actin条带很明显，开始觉得可能是自己蛋白测定或稀释的时候有问题（虽然自己觉得这种可能性很小），但是还是跑了此普通的蛋白电泳来验证自己的上样量，在普通蛋白电泳图上显示我的蛋白上样量是一致的。那现在说明beta-actin确实在病变的组织中表达量发生变化了，既然这样为什么beta-actin还能作为一个看家基因呢？是不是用GAPDH会好些？如果beta-actin、GAPDH、tublin在某种病变的组织中均发生较大改变了（这种情况有可能，虽然几率很小），那该如何选择内参呢？请教各位在行的朋友，谢谢

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actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括alpha-skeletal muscle actin，alpha-cardiac muscle actin，alpha-smooth muscle actin，和gamma-smooth muscle actin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括beta-actin(β-non-muscle)和gamma-non-muscle actin。这些不同的亚型组织分布是不一样的，在肌肉组织中的beta-actin分布就很少，心肌主要是alpha-cardiac muscle actin。因此不同的组织本来就应该选择不同的内参，不能一概而论的。你所谓的病变可能与心肌的重构有关，肌肉中的肌动蛋白很可能就发生了明显的变化。beta-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。尽管最近有一些文章已经开始质疑beta-actin作为内参的有效性（好像是对于上样量>20ug的蛋白区分能力下降，记不清楚了）但是发文章应该还是没有问题的。至于其他的内参也是可以考虑用的，GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，而tubulin和actin类似是细胞骨架的组成部分，但是不是肌肉的主要成分，应该是一个代替品。三种同时发生变化的情况太少了，如果遇到的时候再具体分析，这个不好说，我认为如果是总蛋白的话可以用胞核的内参如PCNA，TATA-box bingding protein（TBP）甚至线粒体的内参来代替，当然我认为这种可能性出现的几率比我买彩票中大奖差不多。今晚回答这个问题对于我来说也是一个考验，很多基础知识都是通过网络和拚命的回忆来的，也算是对于actin这个内参的一个全面了解了，希望有所帮助。