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标题:【讨论帖】western 内参选择

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发表于 2013-4-23 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内参这种东西应该多备几种，actin，tubulin应该都要留一些。同一个比如actin最好也备用两家公司的或者找一个应用物种范围最广的。我做线虫，用sigma的beta actin抗体就啥也抗不到，结果用santacruz抗超浓一坨带。
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，做心肌细胞膜蛋白western blotting,应该选择什么蛋白做内参？
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dog002[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么，我想请教一下用过β-actin做内参的朋友，有没有遇到过β-actin抗体检测不到小鼠心肌和肌肉组织β-actin的情况？当然前提是：1，我的确提取到了心肌和肌肉组织的总蛋白，且检测到了我的目的条带。2，用此抗体可以检测到其他组织中β-actin条带。
也发现，在碧云天网站上，曾提及“本抗体不能用于成年动物心肌或骨骼肌的免疫染色”。cuturl('http://www.beyotime.com/aa128.htm') 具体什么原因造成这种情况，我也不想太麻烦去搜了，还请知道的战友指教。同时也算是给朋友们提个醒吧。

另，我曾用GAPDH抗体死活也检测不到小鼠肺组织的条带，由于这个做的时间比较早了，不知道是抗体原因还是我WB的原因还是其他原因，不得而知。仅供朋友们一个参考吧。

wb做了很久，也遇到了上述问题，β-actin（鼠单抗和兔多抗的）在肺组织均可检测到，而在心肌一直做不出来，在心肌目的蛋白是检测到，看到各位上面的讨论，受益匪浅，想请问一下，各位做心肌组织时选用内参相对较好的是哪一种？其是什么公司的产品编码？ 望请告知
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目的蛋白约为100Kd,为细胞内信号蛋白,那内参选用"GAPDH"好还是"β-actin"好呢?
然后目的蛋白一抗为兔源的,内参一抗为鼠源的,这样做得到的结果对发文章有影响吗?一抗同一来源的结果更有说服力吗?除了要多买个IgG,不同的一抗来源还会有什么其他影响吗?
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发表于 2013-4-23 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
正好要做大鼠心肌组织的WB，正巧要买内参β-actin，差点就买了 CELL SIGNALING的4967，好险！
看了xray19 大神的帖子后，决定还是好好去研究一下买哪家公司的产品了。
或许GAPDH也可以考虑一下。
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冰儿0109[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做心肌，提胞核内的蛋白，目的蛋白分子量57KD，有用组蛋白做内参的吗？
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冰儿0109[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做核蛋白的有用GAPDH做内参的吗？
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zzzz[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位高手请教一下，我做的是心，肝，脾，肺，肾，脑等组织，其目的蛋白是18KD，应选用哪种内参合适？
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kswl870[使用道具]
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发表于 2013-4-23 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还是用GAPDH吧，beta-catine 影响因素挺多的，虽是组成性表达，但提取组织蛋白时用的裂解液不同，破碎的时间不同等都可能会影响beta-catine提取出来的量
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hustwb[使用道具]
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发表于 2013-4-23 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近做的β-actin抗体不好，想重新买个内参，用β-actin或GAPDH均可以，有什么公司的性价比高些，值得推荐的吗？谢谢啊
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