小中大
我来说点不同看法
内参是western中重要的一步,但是是不是每次都要做,答案显然是否定的.只有在需要得到可发表的结果的情况下,才有必要做一个漂亮的内参.
1: western本身就是一个很粗略的定量方法,严格的说,根本不具有定量的能力,所有从werster里出来的表达量的区别(明显的“有”“没有”的区别属于定性),都是不精确的,苛刻点说,压根就是不可采信的。所以内参只是一个为了结果完整性而出现的东西,平时做western如果次次做内参,完全没有必要,也没什么太大帮助
2: 那么如何控制上样量,有很多办法,可以通过SDS-PAGE粗略判定,这个方法一点不比用内参差,那些abundant protein在胶上完全可以通过肉眼辨别条带的深浅,反倒是用western判断很困难,在western结果出来都是很黑的条带,不一定在胶上看起来就一样. 而最直接的办法是在准备sample的时候就下好功夫,取多少个细胞,最终溶解在多少sample buffer里面,是可以控制出load的时候每条lane大概有多少细胞的.
内参,尤其是werstern的内参,绝大多数情况是作为“漂亮的马后炮”出现的,当你前期控制完之后,再放上一个内参告诉别人“看,的确如我所料”.
werstern次次做内参,完全没有必要