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标题:[未解决]质粒酶切不对

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
cnu2007[使用道具]
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发表于 2009-12-3 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

质粒酶切不对

请教大家一个问题，我问同学要了个1301的质粒，用BglII 和EcoRI切出4条带来，本来应该两条带。而且我可以保证酶切是完全的。可同学说他给我的质粒没问题，前几天他用还是好的。高手给解决一下吧
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dragon5[使用道具]
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发表于 2009-12-4 09:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原始质粒或者构建好的质粒上有4个酶切位点吧，或者切的不好，酶出现了星号活性
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发表于 2009-12-4 09:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 cnu2007 的帖子

有可能是酶切不完全吗，也就是没有完全切开的质粒的带  切开的含有目的基因的质粒带  还有就是部分双酶切的目的基因和去基因质粒的带....但我不确定会不会这样...
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HEC_css[使用道具]
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发表于 2009-12-4 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪个公司的酶哦
换个试试吧！！可能是酶切不完全
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ross_racheal[使用道具]
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发表于 2009-12-4 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 cnu2007 的帖子

酶切不完全，基本可以这样确定，下次你把质粒量减少，酶切时间延长，看看，再有，给你个trick,37°酶切完后，你放在65°5分钟，然后马上放冰上，最后加loading buffer,跑胶的效果非常好 ，成图效果是很完美的，咱做实验就是要追求完美~

道理大家都懂，我就不说了。希望你试验成功
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感悟人生[使用道具]
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发表于 2009-12-4 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是酶被污染了  或者是质粒不纯
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beijing2008[使用道具]
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发表于 2009-12-7 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换了个酶多切一些时间试一试，还不对可能就是质粒不对了。
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