 小中大 (3)必要的时候需用不同极性的柱子对目标物进行对比分析。对于多组分的研发反应液来说，仅仅靠一根柱子就定方法的话，存在有些杂质和目标峰没有分开(或者完全包在主峰里面)的风险，因此采用不同极性做出来的结果进行对比可以有效的避免类似的事件的发生。如果二者一致的话，一切都好说;如果二者不一致的话，需结合其它定性手段综合分析，决定柱子的选择!这个需要多摸索，多实践，多积累来完成!!!
(4) 色谱柱参数对分离的影响. 毛细管色谱柱的参数主要包括四个方面:固定液极性、柱长、内经、膜厚等。根据固定液极性的强弱可以非极性柱(DB-1或者等同的其它品牌)、弱极性柱(DB-5或者等同的其它品牌)、中等极性柱(DB-17或者等同的其它品牌)、强极性柱(DB-WAX或者等同的其它品牌)，在选择柱子的时候应该根据样品本身极性的强弱依据“相似相溶”原理进行选择;柱长对分离的影响也很明显，通常柱子越长，分理效果越好，但是保留时间增加的也很明显，这本身是个矛盾，需要找到一个平衡点!对于特别难分离的物质，一般可以选用长柱子。内径对柱容量和柱效有较大的影响，内径越小，柱效会变高，但柱容量会下降，这个参数选择的空间不是很大。膜厚是一个选择空间比较大的参数，通常膜厚越厚，对分析物的保留会增加，保留时间增大，有助于分离，但是由于传质阻力的增加，柱效会降低，因此，如果你分析的是保留弱的物质(比如一些小分子)，可以考虑试试厚液膜的柱子;反之则选择薄液膜的柱子。
3.温度程序的优化
对气相色谱而言，仅仅依靠温度程序的优化是无法从根本上改变分离度的，只能在一定范围内改善分离度。举个例子，如果你选定其它的色谱条件(柱子，载气)，A 物质和B物质在某个温度程序下是一个峰(就是没有任何分离迹象)的话，此时无论你怎么改变温度程序，A和B能分开的可能性都很小，此时最有效的办法就是更换其它极性不同的柱子或者换根长柱子试试!所以说温度程序的优化对难分离物质对的分离作用很有限!经常有板油发贴子问：我想分析某个物质(已知结构式)，该用什么程序呢?对于这种问题，最简单的办法，你自己试几个温度程序不就行了吗，很多物质的分析是没有现成的分析方法的，色谱是一门实践的学科，自己多试几个温度程序，哪个分离度好就用那个!这个需要自己去摸索，实践! 还有一个问题，很多板油会问，到底是恒温分离度好还是程升分离度好?对于这个问题，个人觉得很难回答!其实首先要明确程序升温的目的是干吗的，程升多应用于组分沸程宽的混合物的分离的，简单说就是分析样品中各组分的沸点差异比较大的样品多用程升来做，如果不是这样的情况，不建议使用程序升温。下面以一个例子的分离来说明恒温和程序升温对难分离物质对进行分离的影响，如图所示，B的温度程序是180℃起,10℃/min程序升温至300℃;A的温度程序是 240℃,恒温12min后20℃/min升温至300℃.
从图中对比可以看出,程升时大峰后面的两个小峰分离度较差,且和大峰的分离度也不是很好,经过较高的一个温度恒温后,那两个小峰的分离度得到了有效的改善,效果还是比较明显的!但这并不意味着恒温的分离度一定优于程序升温,不能一概而论,要具体问题具体分析再具体解决!
二.分析方法的评价
分析方法建立后需要对方法的准确性、稳定性、可行性进行一个评估，需要做的实验包括：检出限、线性范围、重现性、回收率等。检出限是指所建立方法可以检测到的最小样品浓度，通常以3倍信噪比计算;检测限可以间接说明方法的灵敏度。线性范围通常有检测器的特性所决定，越大约好。重现性实验包括多次连续进样分析的重复性、不同时间的重复性、不同型号仪器间的重现性、不同实验者之间的重现性等等，重现性可以表征方法的稳定性和数据的精密度，是一个很重要的参数。回收率实验是表征方法准确度的重要参数，一般情况下要大于60%，越接近100%越好。
当所有评价实验都满足要求后，说明该方法在实验室是可靠的，还需要在不同实验室间多次对比实验才有可能会成为标准方法。
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