液相色谱

用OPA作为衍生剂，waters荧光检测仪，监测脑透析液中的glu和gaba，这两种物质的浓度大概是30-50nmol/L，每个样品20uL。用外标法，在走10nmol/L~100nmol/L标准样的时候，glu和gaba的浓度与峰面积的线性关系极差。可笑的是：有时候10nmol/L的峰面积居然与50nmol/L的峰面积差不多。走了好几次了，真是没办法。

另外：走1umol/L~10umol/L的标准样时，线性很好

请问有什么办法解决，或者用别的衍生剂，能测到10nmol/L的glu和gaba，先谢过了！

检测方法是成熟的吗？OPA加入的量是不是足够，衍生过程是否完全等有没有检查过？

多谢！

检测方法就是用参考文献的，都大同小异，缓冲盐控制ph值6.0，然后用缓冲盐与甲醇混合梯度冲洗。

OPA加入的量应该是足够的，因为用同样剂量OPA衍生剂衍生1uM，2.5uM，5uM，10uM的glu和gaba的时候，线性就很好。

衍生时间是90秒，但是不知道该怎么判定衍生完全。

中国的文献和日本的文献大都不可信！

找欧美的文献看看！！

那就是浓度太高了，采用样品稀释、或减少进样量了。。

理论上不应该出现这种情况。
这么小的量，很容易被其他因素干扰，比如进样针上的样品残留、进样口处的样品残留等，试着增加洗针次数和进样前样品溶液的润洗次数，浓度由小到大进并每个样品都连续做3次以上的平行样。

另外，每次进不同浓度的标样前，可先进一空白判断系统是否存在干扰。

那你能不能把样品也处理到线性好的范围内呢，衍生后的样品是否稳定，如果稳定，那么衍生90s，与衍生10min和20min的比较，面积应该是一样的，如果后的更大，那就可能衍生时间要延长了，我想10-100的浓度也可能不在浓度不在线性范围内才不成线性。

俺也觉得污染是最可能的罪魁祸首，下次把进样针，进样阀仔细冲洗n遍，然后走一针空白的衍生剂，看有没有峰出现。

OPA与上述氨基酸反应90s反应最完全，时间长了就不稳定了。我一般是读秒90s后加入反应终止剂，结果还是线性差。