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标题:【讨论帖】蛋白芯片技术答疑帖

dragonkilly[使用道具]
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我们现在常用的是抗体芯片,识别的蛋白基本上都是模式动物的,例如人、大鼠、小鼠,植物的基本没有。

而对于模式动物,在筛选蛋白质表达水平实验时,芯片一定要使用针对该物种的芯片;在检测蛋白质修饰状态,例如磷酸化水平的时候,芯片的兼容性则比较好,因为这些修饰位点往往比较保守,我们用检测蛋白磷酸化水平的芯片检测过人、大鼠、小鼠、猪、狗、猴、蛔虫等样本,结果都很不错。
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dragonkilly[使用道具]
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国家批准上市的蛋白芯片有一种是基于NC膜的(肿瘤标志物的检测),而且使用化学发光的方法。请问NC膜在使用时需要注意些什么?膜的孔径有要求吗?(0.45、0.22)这种蛋白芯片的点样是用点样针好还是用喷膜针好?请高人指点。

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玻片上固定NC膜,我只是使用过商业化的芯片,没有自己制备过。

我使用过0.22um的PVDF膜进行过类似实验,是使用喷点的方法,效果很不错。当然要想做好,不是仅仅喷上这么简单,要对实验条件不断的摸索优化。
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kuaizige[使用道具]
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1.基因芯片和蛋白质芯片的区别和联系

2.如何在检测领域推广蛋白质芯片?
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相关疾病:
循环系统疾病


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1.基因芯片和蛋白质芯片的区别和联系

2.如何在检测领域推广蛋白质芯片?

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1.基因芯片上固定的是核酸探针,蛋白质芯片上固定的是抗体、抗原,这两种芯片上包含的物质是不同的;

2.这个问题我不是很明白,现有的蛋白质芯片有应用于科研领域的,例如疾病标志物筛选、肿瘤发病机制研究、药物作用机制研究等;也有应用于临床检测的,例如肿瘤标志物检测芯片、心血管疾病相关因子检测芯片等等。
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ero11[使用道具]
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1.基因芯片和蛋白质芯片是否可以检测同一个目标样品,其结果差异多大

2.扫描结果的设备可否通用
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1.基因芯片和蛋白质芯片是否可以检测同一个目标样品,其结果差异多大

2.扫描结果的设备可否通用

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1.基因芯片和蛋白芯片是可以检测同一样品的,区别在于检测的是该样品的核酸水平或者是蛋白质表达、修饰水平,由于是在不同的水平上进行检测的,所以结果总会有差异的,具体差异多少无法判断;

2.若是通用型的玻片芯片,都可以使用普通的芯片扫描仪进行扫描,特殊规格则要求配套仪器。
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相关疾病:
鳞状细胞癌肿瘤转移
与大家分享一篇抗体芯片的应用

抗体芯片技术应用于肿瘤侵袭机制研究(Kang S, Elf S, et al.: p90 Ribosomal S6 Kinase 2 Promotes Invasion and Metastasis of Human Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Cells, Journal of Clinical Investigation 2010, 120(4):1165-1177 )

Emory大学的研究者通过前期实验筛选到RSK2蛋白,认为RSK2与头颈部鳞状细胞癌转移相关。研究者首先使用头颈部鳞状细胞癌细胞系、临床标本进行了RSK2表达水平的检测,继而进行了RSK2活性抑制实验,RNAi实验,以及stable knock down实验证明了RSK2与肿瘤细胞的转移相关,在此基础上,研究者将RSK2 knock out的头颈部鳞状细胞癌细胞系接种到裸鼠体内,观察到敲除后的细胞系不影响肿瘤形成,但是影响了肿瘤的转移。
那么RSK2影响肿瘤转移的机制是什么呢?Western Blot检测发现与转移相关的Erk、Akt、Stat3都没有变化,那么其他激酶呢?
研究者选择了MAPK pathway的磷酸化水平检测芯片(包括约90个磷酸化位点),发现RSK2敲除前后,取cut off为磷酸化水平下调15%,筛选到信号通路中的多个成员,大多数和细胞的侵袭、转移相关,其中包括研究较清楚的CREB,以及一种RSK2的新的底物Hsp27,并揭示了其与肿瘤转移相关的机制。


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目前接触式针点点样仪 是否已经很难超越压电式喷点点样仪了呢?

另外如果在酶标板条上做芯片一般要对基质做何种处理?

谢谢
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dragonkilly[使用道具]
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目前接触式针点点样仪 是否已经很难超越压电式喷点点样仪了呢?

另外如果在酶标板条上做芯片一般要对基质做何种处理?

谢谢

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究竟是接触式针点点样仪还是压电式喷点点样仪,哪种更优越并没有具体的定论。按照经验,还是要根据片基、样品类型、芯片阵列等因素综合考虑。没有最好的,只有最适合的:)

普通的酶标板条我没有用过,我用过底部为PVDF膜的96孔板制备蛋白芯片,效果很不错,甲醇处理后,PBS润湿即可。
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applebook=213[使用道具]
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我们最近购买过R&D公司的一款蛋白芯片,检测血浆中一些指标。但是结果很不理想。完全按照说明书操作,可是在对照组和样本组中并没有明显差别。其中部分指标是已经大样本临床检测过的(多数是ELISA试剂盒检测的),证实会有差异的。

打电话咨询了该公司上海总技术部,也没给回复。询问是不是敏感性比较低,所以很多指标用ELISA试剂盒能检测到的,蛋白芯片检测不到。回复是:不存在敏感性问题,但是敏感性不会比western差。
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