蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】每升菌液的包涵体产量问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 21  2/3 ‹‹123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】每升菌液的包涵体产量问题

zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
11

发表于 2013-4-25 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vivian4123 于 2013-4-25 13:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
EGF烟台康达尔每年340克的产量就称王称霸，。这个市场只能说是还没有真正的王者，并不是没有人去认识。

===============

每克能到60万?

我要大肠杆菌包涵体的高表达质粒，您能提供么？市场的事情自然有人做，我只管技术。
顶部
zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
12

发表于 2013-4-25 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外信号肽这种夹带的东西您后续切除了么？是干净的EGF 的 53个氨基酸？
顶部
vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
13

发表于 2013-4-25 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

53个氨基酸，跟天然EGF完全一样！
顶部
zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
14

发表于 2013-4-25 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您能做到多少银子一克？方便就说，不方便也理解。
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
15

发表于 2013-4-25 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

普通挡板摇瓶，增加溶氧；优化后LB培养基，增加营养。菌株使用公司一般菌株即可，全菌湿重在20g/L左右，拿包涵体的话湿重在10g/L左右。因为我们一般情况都做可溶性的蛋白，包涵体了解较少。但是如果还要求菌量的话，可以将摇瓶换为发酵罐。个人感觉，做包涵体不怎么需要特殊质粒。
顶部
is2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75851
精华 0
积分 510
帖子 680
信誉分 100
可用分 4233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
16

发表于 2013-4-25 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以上说的得率是在16℃过夜条件下的数据，37℃诱导包涵体3小时数据暂无。
顶部
bling[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77268
精华 0
积分 383
帖子 486
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
17

发表于 2013-4-25 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

摇瓶37度过夜的上限大约是30g/L湿菌体，洗净的包涵体一般10g/L左右. 发酵罐能达到这个数字的两倍是正常的.

和质粒确实没什么关系，T7-DE3表达系统目前还没有改进的必要。
顶部
zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
18

发表于 2013-4-25 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
普通挡板摇瓶，增加溶氧；优化后LB培养基，增加营养。菌株使用公司一般菌株即可，全菌湿重在20g/L左右，拿包涵体的话湿重在10g/L左右。因为我们一般情况都做可溶性的蛋白，包涵体了解较少。但是如果还要求菌量的话，可以将摇瓶换为发酵罐。个人感觉，做包涵体不怎么需要特殊质粒。

============================================================================

非常感谢！
包涵体通常是表达极力避免的，主要是后面还得面临复性大关。能直接表达可溶的蛋白还是省事。
顶部
zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
19

发表于 2013-4-25 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
摇瓶37度过夜的上限大约是30g/L湿菌体，洗净的包涵体一般10g/L左右. 发酵罐能达到这个数字的两倍是正常的.

和质粒确实没什么关系，T7-DE3表达系统目前还没有改进的必要。

============================================================

兄台信息价值非常，甚为感激！
过夜表达，IPTG分次加入还是一次性达到浓度？方便稍微谈一下细节么？？
顶部
bling[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77268
精华 0
积分 383
帖子 486
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
20

发表于 2013-4-25 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
兄台信息价值非常，甚为感激！
过夜表达，IPTG分次加入还是一次性达到浓度？方便稍微谈一下细节么？？

============================================================================================================

摇瓶收包涵体用自诱导培养基如ZYM-5052，省事省心。可溶表达的话，摇瓶里IPTG一次加到最终浓度，大罐用乳糖诱导则可以根据耗氧量的变化多次添加。

Amp抗性的质粒可能有一个问题就是beta内酰胺酶是分泌表达的，菌密度不高的时候培养基里已经没有抗生素了，诱导后很容易丢质粒。补加也会马上消耗掉，唯一的办法是停止培养，把菌液抽出来离心用PBS洗净换新培养基。Kan抗性的载体更适合工艺的放大。
顶部
 21  2/3 ‹‹123››