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标题:【讨论帖】生物制药产业化及膜分离技术,下游纯化

remenb[使用道具]
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楼主你好,我现在准备组建一条生产线,主要用于发酵液的除菌和浓缩,想用切向滤,用陶瓷膜过滤是否现实?过滤除去发酵液中的菌体会不会很快造成膜很快堵塞?我们一周生产量在40T左右,大约需用多少平米的膜?还有,在浓缩过程中,蛋白质损失有多少?我的蛋白质75KD,有没有人做过相关的数据?过滤和浓缩是否需要两套设备,还是在一套设备内就可以搞定?
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两位真是高人!我想问一下楼主如果要使用切向流的话,我需要购买什么仪器,大概得多少money?谢谢!!!

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根据您的处理量选择相应的产品。
如果是实验室规模,若干毫升至几十升料液可选择0,1~0,5M2的超滤器,价格几万块人民币。
要是中试规模,可选择0,5~2,5M2的超滤器,价格一万美金左右。
不过要是您想做什么的话,最好和专业人员交流一下,包括选择型号及规格。
您也可以和我联系。
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楼主你好,我现在准备组建一条生产线,主要用于发酵液的除菌和浓缩,想用切向滤,用陶瓷膜过滤是否现实?过滤除去发酵液中的菌体会不会很快造成膜很快堵塞?我们一周生产量在40T左右,大约需用多少平米的膜?还有,在浓缩过程中,蛋白质损失有多少?我的蛋白质75KD,有没有人做过相关的数据?过滤和浓缩是否需要两套设备,还是在一套设备内就可以搞定?

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您所说的正是我最感兴趣的。是否在北京?方便的话,您可以和我联系,我们交流一下相关的问题,会给您一个满意的方法。
对于发酵液的澄清,如果料液比较粘稠的话,选择陶瓷膜当然是很好的选择,同时也可以考虑震动膜。当然要看您的发酵液的具体情况。还有就是您的发酵液是什么类型,是原料药?抗生素?最好能够具体一些,那么回答您的问题要好一些。
方便的话,请与我联系,或者PM我。
过滤和浓缩当然是2套设备,问题是您是否一定需要过滤还要浓缩?需要具体讨论。
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呵呵,多谢楼主的回复

我再说点
1,应该说象PVDF的基质是最低吸附的,当然我的“绝对”也许是过分了一点,不过我只不过是想表达这种程度,就象millipore自己的说明书上说他的0.22针头式滤器
2,millipore的超滤系统,其实主要是膜,分为纤维素和聚醚枫2种,化学稳定性似乎差不多,对于某几种特定的化学试剂可能各有千秋,但总体上差不多,所以我说他们的化学稳定性差不多,呵呵

为什么楼主不能对PES和纤维素两种膜的物理机械强度,给我一个参考呢,因为象这样的数据只有楼主这样的专家通过长期的使用经验才有可信度,甚至millipore上海办事处的人,也不能给个明确的说法,他们只是说,放心使用,呵呵。我不是担心它的清洗性(因为我本来的组分就比较干净),我是担心因为重复使用,在操作上,会经常去触碰,所以想问问这个物理强度差异

3羟基磷灰石填料,就是Ca10(PO4)(OH)2,所以填料上的基团一看就明了。说到机理,其实现在还是在不断发展中的,一些细微的地方也不是太明确,只是原理上讲分为:
ca主要对于酸性蛋白,带COO-的吸附;PO4主要对与碱性蛋白为主,主要是吸附NH2,同时存在疏水和离子交换。

可以纯化的样品也比较多,蛋白质,DNA,病毒,内毒素等

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由于晶面的存在,有离子交换的作用,可以和特定pH值下的蛋白吸附,然后进行色谱分离,书上是这样说的。至于疏水相互作用,HIC, 我还是不能够理解。
在HIC和IEC之间是有很多互相矛盾彼此不能兼容的地方,比如,IEC用的洗脱方式是盐,尤其NaCl的浓度剃度达到洗脱的目的,或者用改变pH值的办法。而疏水相互作用,HIC,是利用蛋白在高浓度吸附,低浓度解析的原理,所使用的盐经常是硫酸铵,是浓度从高到低的过程,不知道如果用磷灰石,如果用您所说的综合HIC和IEC,那么我又该如何理解?
请赐教,谢谢!
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呵呵,实际上为什么说羟基磷灰石现在还在发展和成熟中,就是因为他的一些机理还是在探索中的,尚不是很很明了。很多适用的领域正在被探索

其实IEC和HIC是不矛盾的,因为基团的吸附能力不一样,可以找到各自的洗脱盐离子浓度的,因为羟基磷灰石的特殊基团的吸附特性有些理论上和实际上是有很大差别的,就比如说DNA的吸附

HIC好象是应该增加溶液的盐离子浓度,突出体系里的疏水性,才吸附蛋白的,而且不同的疏水集团,吸附能力也是不一样的,有些吸附性强的集团和疏水蛋白,不一定用纯水就能洗下来,还要加些甘油和土温什么的。

这些你应该问你的师兄chromatography才对呀,呵呵,我也是只知道一点皮毛,赐教什么的根本谈不上的,呵呵

互相学习,互相进步

PS:
2,millipore的超滤系统,其实主要是膜,分为纤维素和聚醚枫2种,化学稳定性似乎差不多,对于某几种特定的化学试剂可能各有千秋,但总体上差不多,所以我说他们的化学稳定性差不多,呵呵

为什么楼主不能对PES和纤维素两种膜的物理机械强度,给我一个参考呢,因为象这样的数据只有楼主这样的专家通过长期的使用经验才有可信度,甚至millipore上海办事处的人,也不能给个明确的说法,他们只是说,放心使用,呵呵。我不是担心它的清洗性(因为我本来的组分就比较干净),我是担心因为重复使用,在操作上,会经常去触碰,所以想问问这个物理强度差异
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我现在是四川,是做饲用酶制剂,我们新鲜的发酵液不粘稠,工艺主要要求没有固形物存在.后期一定要浓缩.震动膜有些什么特点?现在正处于收集陶瓷膜相关的资料,从理论到应用方面,还有它有些什么不能解决的问题!
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羟基磷灰石分离蛋白的机理并不是百分之百清楚。
一般认为,酸性蛋白和Ca++发生螯合作用,这比一般的离子交换静电作用要强很多倍;碱性蛋白带正电,和PO4-3作用,这应该主要是离子交换作用,这种吸附对于离子强度是很敏感的。
但是前面的作用占主导的时候,甚至有时1.5M NaCl也洗不下来,必须用高浓度的磷酸钠才能洗脱。
此外还存在有排斥作用,是一个综合的作用,此外还可能有别的机理。

印象中有几篇综述,上述机理也不能完全解释一些现象,有的时候只能根据经验尝试,不同的蛋白也是不一样的。
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我现在是四川,是做饲用酶制剂,我们新鲜的发酵液不粘稠,工艺主要要求没有固形物存在.后期一定要浓缩.震动膜有些什么特点?现在正处于收集陶瓷膜相关的资料,从理论到应用方面,还有它有些什么不能解决的问题!

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根据您说的,加上我对工艺的了解,您的情况我大体知道。下面是我的看法。
1, 您首先需要澄清。发酵液的澄清,有2种方法可以考虑:1),TFF切向流方法,即震动膜或者陶瓷膜;2),德国SEITZ的滤板或者压滤机。
2,澄清的料液的浓缩,根据您的蛋白分子量的大小,确定浓缩的膜的分子量。还有,膜面积的大小,需要您实验获得相关的参数决定面
积。
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呵呵,实际上为什么说羟基磷灰石现在还在发展和成熟中,就是因为他的一些机理还是在探索中的,尚不是很很明了。很多适用的领域正在被探索

其实IEC和HIC是不矛盾的,因为基团的吸附能力不一样,可以找到各自的洗脱盐离子浓度的,因为羟基磷灰石的特殊基团的吸附特性有些理论上和实际上是有很大差别的,就比如说DNA的吸附

HIC好象是应该增加溶液的盐离子浓度,突出体系里的疏水性,才吸附蛋白的,而且不同的疏水集团,吸附能力也是不一样的,有些吸附性强的集团和疏水蛋白,不一定用纯水就能洗下来,还要加些甘油和土温什么的。

这些你应该问你的师兄chromatography才对呀,呵呵,我也是只知道一点皮毛,赐教什么的根本谈不上的,呵呵
谢谢您的建议。
互相学习,互相进步

PS:
2,millipore的超滤系统,其实主要是膜,分为纤维素和聚醚枫2种,化学稳定性似乎差不多,对于某几种特定的化学试剂可能各有千秋,但总体上差不多,所以我说他们的化学稳定性差不多,呵呵

为什么楼主不能对PES和纤维素两种膜的物理机械强度,给我一个参考呢,因为象这样的数据只有楼主这样的专家通过长期的使用经验才有可信度,甚至millipore上海办事处的人,也不能给个明确的说法,他们只是说,放心使用,呵呵。我不是担心它的清洗性(因为我本来的组分就比较干净),我是担心因为重复使用,在操作上,会经常去触碰,所以想问问这个物理强度差异

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我不太了解该公司的膜,也没有用过,所以不能给您任何建议。在我的手头,只用改性的PES膜,和您不是同一供应商,所以无法给予意见,请谅解。
不过,我不明白的是,您怎么会经常“触碰”膜?一般,Membrane cassette装上去之后,很少拆的。即便重复使用也很少拆。
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fsdd817[使用道具]
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Ceramic membrane definition

Description:

The Membralox® ceramic membrane is an asymmetric membrane composed of a porous support and a filtering layer.

The support is the most porous part of the membrane. It is produced by sintering high purity alumina particles, which creates a highly permeable yet very strong macroporous structure.

The active layer is composed of ceramic particles (alumina, zircona or titania depending of the type of layer) with a perfectly defined size to create a filtering layer with a well defined pore size. It lines the inside surface of the filtration channels and is in direct contact with the fluid to be treated.
Of minute thickness, this active layer is usually bedded on an intermediate layer by high temperature sintering to produce an exceptionally robust structure. It lends the asymmetric membrane its selectivity and separation efficiency.

The liquid being filtered flows within each of the channels according to the principles of crossflow filtration and the filtrate passes through the active layer and then through the porous support between the channels before reaching the outside lateral surface, as shown in Figure 2.

As the Membralox® support material is exceptionally permeable, the pressure drop caused by the filtrate passing through the support can generally be considered negligible compared to the pressure drop of the filtrate passing through the active layer.

The liquid being filtered flows within each of the channels according to the principles of crossflow filtration and the filtrate passes through the active layer and then through the porous support between the channels before reaching the outside lateral surface, as shown in Figure 2.

As the Membralox® support material is exceptionally permeable, the pressure drop caused by the filtrate passing through the support can generally be considered negligible compared to the pressure drop of the filtrate passing through the active layer.
In the Membralox® line of ceramic membrane products, the high purity ceramic material of the support and the microfiltration active layer is alumina (> 99.97%). Active layers in the ultrafiltration pore size range are made of zirconia or titania respectively. All these materials are extremely resistant to a wide range of pH values, temperatures, pressures and chemicals. Nevertheless, some chemicals, e.g. phosphoric or hydrofluoric acids could react with ceramic membranes. In case of doubt, please contact our Scientific and Laboratory Services.

Special modifications obtained by coating each of the ceramic particles of the membrane structure can be offered. These modifications change the surface characteristics of the membrane, and may improve performance in specific applications. For example, the B modification provides increased resistance to phosphoric acid. Table 1 summarises the Membralox® range of ceramic membrane pore sizes.

Note: in the early 1980s , Membralox® ultrafiltration membranes with active layer made of gamma alumina were also available, but since this form of alumina has limited chemical resistance and lower permeability, it is now only available for some specific applications.
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