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标题:【讨论帖】生物制药产业化及膜分离技术,下游纯化

fsdd817[使用道具]
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请问前辈,能用SDS-PAGE检测分子量为3500Da的蛋白吗?如果可以的话,应该如何配胶呢?我想对发酵液中的NISIN检测和定量,这么做能作到吗?期待回复!

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基本上不可能。
分子量太小,非常容易在电泳过程中走掉。染色时候看不到,灵敏度不够。您可以尝试银染。但只能检测,定量肯定不可以。还是上面所描述的原因,容易走失。
对于这么大小的多肽,我曾经在无数次的操作中,有那么几次获得理想的结果(考染,我用过很多种染色剂),当年我做SDS-PAGE还是国产非常简单的仪器,我也曾成功做过银染。我的认识是:很难,但是不是绝对不可以。
既然您是定量,可以考虑用RP-HPLC,我认为是最好的办法。
关于NISAN,我想多说几句。据说该分子容易聚合,是否确实,什么条件,我没有经验。要是聚合的产品,那就复杂了。
RP-HPLC是最好的办法。定性,定量等。
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fsdd817[使用道具]
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您说的陶瓷膜是不是Pall有啊?
一般的细胞培养液的flux是多少呢,价格?我想看一下处理同样体积的培养液,成本相差多少?好像无机膜用的还是不如有机膜多,不知道是不是无机膜的技术不容易实现,所以昂贵?
陶瓷膜也是切向流方式的吧?

最近太忙了,过一段时间忙过去了一定详细讨教!

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陶瓷膜是无机膜,有很多优点,也是近几年才开始为大家重新认识的。
全球有很多生产商,尤以法国的EXEKIA的产品最好,商品名Membralox,教科书上就是用该名字命名之。其主要在通量和背压上比同类产品优势,当然价格也贵。还有德国书马赫,其它还有几个品牌。
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您说的陶瓷膜是不是Pall有啊?
一般的细胞培养液的flux是多少呢,价格?我想看一下处理同样体积的培养液,成本相差多少?好像无机膜用的还是不如有机膜多,不知道是不是无机膜的技术不容易实现,所以昂贵?
陶瓷膜也是切向流方式的吧?

最近太忙了,过一段时间忙过去了一定详细讨教!

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Flux对于不同的料液,数字不一样。需要实验给予。大约100~200LMH。
但是该产品往往是大规模应用时更好。小设备价格高,实验室一般不会买。无机膜有很多优势,而且恰是有机膜不能实现时候的最好选择。比如在处理有机溶剂时候,无机膜是更好的选择。
同样,它属于TFF。对于年黏度大的产品很实用,最显著的特点是寿命长。因为他耐酸碱及高温,可以在极端条件下使用和清洗,恢复极好!
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fsdd817[使用道具]
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100L可能是比较好处理的。
说明一下,陶瓷膜分2部分——所有的TFF设备都是这样——设备和膜。膜是实现功能的核心部件,而合理地设计设备也是很重要的,尤其是大量处理,如每天处理上百吨料液的工厂。
您可以买一个膜,然后选择一个工程公司给加工设备。这样可能便宜一些。但是要是您使用频率不高,就不建议购买了。
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fsdd817[使用道具]
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要是是考虑品质的话,可以考虑3L进行实验。或者考虑死端过滤,用深层滤器。当然,选择哪种方式,最好把产业化的的成本考虑进去,选择合适方式。如果要获得工艺参数,需要进一步放大。
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04906[使用道具]
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各位高手,大家手头又没有关于发酵或者纯化工艺放大方面的综述性资料啊,我正做着方面的工作,想大致了解一下,过几天的seminar也可以用来做PPT。谢谢各位了。
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wu11998866[使用道具]
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我想请教一个问题,新霉素在提取纯化过程中,能否分开 B与C组分
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04906[使用道具]
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我说的也是隔膜压力表,当时因太着急了没有注意到输入错误。
其次,我想补充的是,我上述说的压力表的价格确实没错(包括连接压力表的三通),总共14000元(人民币)左右,并且每年都会以10-20%的速度递增(这是他们公司的成文规定)。关于压力表不是原产于安玛西亚公司,888君说的对,但是因为我这边的成套的层析设备都是从他们公司进的,这是从购货单上查到的价格。
再次,上海日泰生产的隔膜压力表,我感觉还是不错的,至少已经能够符合GMP要求了(也是316L不锈钢材质,且无卫生死角),并且从那位仁兄的需求来看,求接口完全可以用卡箍快捷接上的。但是,作为隔膜压力表的特性,一般的是需要三通来跟管路连接而不像螺丝接口型的那么方便。我这边是要求严格的生物制品GMP车间,用日泰生产的压力表代替从安玛西亚购进的压力表完全符合生产情况,并且在价格上相差又很大,所以我还是推荐使用国产的。

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04906[使用道具]
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我想再补充几点意见,

1。如果用膜过滤法处理的话(特别是用无机膜),在收率方面就会损失比较大,正象888君所说的那样,除了膜包外,还需要装载膜包的加持器、连接管道等。
2。对于CHO表达的目的产物,为什么不尝试用STRIMLINE(扩张柱床)层析呢?它的优点(亦即卖点)就是直接从真核或细胞(原核外泌型的也可)表达产物中直接将目的产物提取出来,并且得到比较高的纯化目的。它的原理就是将真核或细胞培养上清从层析柱下面往上反向穿过层析柱,凝胶在流动液体的带动下,呈现均一的分布,目的产物被凝胶吸附,而杂质以及细胞碎片穿过层析柱流出;洗脱时正向洗脱,目的产物被浓缩到收集液中。这样样品不但被浓缩,而且进行了一定程度的提纯。
如果仅仅就这几次使用,可以向安玛西亚公司(北京、上海或广州办事处)申请一下,先免费试用(不时使用)一段时间他们的产品,并可让他们的技术人员帮忙进行实验设计。如果实验效果比较好后,可以再考虑购买。
3。如果就是想用膜过滤法操作,可参考赛多利斯的块状膜堆,可用0.5m2即可,虽然不如无机膜性能好,但是他不用其它辅助设备,只要有一个泵,和一根泵管,接上就可以直接使用,很方便,且死体积非常少,价格也比较便宜,大约几千元一块。如果实验体积增大,则可以直接将两块、三块或更多的并联接在一起就ok了,很方便的。可以试一试。
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is2011[使用道具]
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顺便说一声,TFF有很多很有趣的技术.不是一言两语说的清楚的.而且具体应用也有很多实践.
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