生物制药

我想用超滤方法来分离分子量分别是3300 Da和20000 Da左右的蛋白,目的要得到3300的蛋白,但不能含有一丁点的20000蛋白.已知原始料液中,20000的蛋白已经很少.大概比3300少10~50倍.请问如何选择超滤膜?(包括滤膜截留分子量大小,超滤方式,选择的设备和膜的厂家品牌等等,先谢谢了.

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要得到3300D的蛋白穿出，则需要至少为10－15kD的膜，而要想截流20000D的蛋白，则膜最大不应该超过5kD的膜。所以，如果要达到在3300 D的样品中没有一丁点的20000 D的蛋白，那就必须以牺牲3300D的蛋白收率为代价，可以选择10kD的膜，降低超滤的透过压，让3300D的蛋白在低压下透过膜。至于厂家，板块式膜堆厂家有Millipore公司和沙多利斯等，中空纤维式的有AmershamPharmacia公司等。特别是AmershamPharma公司，最近新设计了一套超滤科研系统，充分揉和了AKTA设备的功能，有利于进行超滤条件的选择和优化。
我建议你可以试一试其他的层析技术，例如可以先通过离子交换层析进行浓缩和初步纯化，再进行分子筛层析，即可很容易的达到分离目的。

我想用超滤方法来分离分子量分别是3300 Da和20000 Da左右的蛋白,目的要得到3300的蛋白,但不能含有一丁点的20000蛋白.已知原始料液中,20000的蛋白已经很少.大概比3300少10~50倍.请问如何选择超滤膜?(包括滤膜截留分子量大小,超滤方式,选择的设备和膜的厂家品牌等等,先谢谢了.

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我的建议是，你可以考虑5KD的膜，或者6KD的膜。通过延长操作时间，可能会达到您的目的。这样可以保证20KD不透过。
还有，如果以上方法因为您的蛋白是线形而不易去除的话，您也可以考虑其他方法，先去除大蛋白。
TFF方式比较适合大规模。
5KD有Membrane cassette方式，6KD有hollow fiber 方式，均能够得到理想结果。选择的设备厂家除了上面提供的之外，现在在国内乃至全球广泛使用的ＰＡＬＬ公司产品，您也可以考虑。
如果您在北京，不妨可以联系我，看看我是否能够帮助您进行实验，开拓工艺。
还有，除了以上的，ＴＦＦ之外的，我也很希望和您一道探讨。
任何问题，欢迎提问。