生物制药

请教楼主一个问题，和超滤有关的，因为自己的数学知识生疏了，特张贴求解！望不吝赐教！
我有1000ml 蛋白溶液要超滤换液，去除其中的3M 尿素，换成PBS。超滤膜截留分子量是10kD，泵的流速是30ml/min,滤出的速度是10 ml/min。装样品的瓶子保持密封状态，滤出多少体积同时就自动的补充多少体积的PBS，即样品的体积保持1000ml。问题是我要多少体积的PBS才能很完全地置换出样品中的尿素(容许残留20000分之一）？
我知道这需要用到微积分方程才可以解答，可是我把所学的一点高数早就全还给老师了。望楼主能告诉我答案和方法！如别的朋友知道也请指点！

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大体上，可以有７个体积达到９９，９％去除，也即１／１０００保留，要是达到１／２００００，那体积是了不得的大啊！

各位有没有用羟基磷灰石作为填料纯化蛋白质的？纯化的示哪种蛋白质？

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个人觉得，它作为填料纯化蛋白的文献很多，但是真正的应用于生产的比较罕见。刘国诠先生在《生物大分子分离与纯化》中有过介绍，引用文献也很多。

请教楼主一个问题，和超滤有关的，因为自己的数学知识生疏了，特张贴求解！望不吝赐教！
我有1000ml 蛋白溶液要超滤换液，去除其中的3M 尿素，换成PBS。超滤膜截留分子量是10kD，泵的流速是30ml/min,滤出的速度是10 ml/min。装样品的瓶子保持密封状态，滤出多少体积同时就自动的补充多少体积的PBS，即样品的体积保持1000ml。问题是我要多少体积的PBS才能很完全地置换出样品中的尿素(容许残留20000分之一）？
我知道这需要用到微积分方程才可以解答，可是我把所学的一点高数早就全还给老师了。望楼主能告诉我答案和方法！如别的朋友知道也请指点！

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我也觉得1/20000需要的体积太大了

要得到3300D的蛋白穿出，则需要至少为10－15kD的膜，而要想截流20000D的蛋白，则膜最大不应该超过5kD的膜。所以，如果要达到在3300 D的样品中没有一丁点的20000 D的蛋白，那就必须以牺牲3300D的蛋白收率为代价，可以选择10kD的膜，降低超滤的透过压，让3300D的蛋白在低压下透过膜。至于厂家，板块式膜堆厂家有Millipore公司和沙多利斯等，中空纤维式的有AmershamPharmacia公司等。特别是AmershamPharma公司，最近新设计了一套超滤科研系统，充分揉和了AKTA设备的功能，有利于进行超滤条件的选择和优化。
我建议你可以试一试其他的层析技术，例如可以先通过离子交换层析进行浓缩和初步纯化，再进行分子筛层析，即可很容易的达到分离目的。

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您的回复正是我想说的,但是我觉得有以下值得商量的地方：
１，“...截流20000D的蛋白，则膜最大不应该超过5kD的膜..."
我在实际工作中遇到的有与您不完全与您说的一致的例子.比如对于形状比较规则的球形蛋白就可以.建议这样的情况最好用实验结果更能说明问题.
2,"...可以选择10kD的膜，降低超滤的透过压，让3300D的蛋白在低压下透过膜..."
TMP是过膜压力,它是取进出口压力之和的一半,减去透过口压力.是过膜压力的平均值,也就是您说的超滤的透过压,它只是近似描述TFF特征的一个参数,实际的情况是,无论您怎么降低,在进口的地方,有最大的TMP, 而在出口处,有最小的TMP,所以您很难降低压力到用10K的膜保证20K的蛋白绝对不透过. 而降低压力意味着牺牲效率,您需要很大的膜面积或者很长的时间去超滤. 在孔径与TMP这对矛盾中,膜的空径的影响可能更大.
3,"...可以先通过离子交换层析进行浓缩和初步纯化.."
要是20KD和3300Da等电点差异很大, 而且小肽容易吸附的话,那用IEC,可能一步就能够达到目的.层析应该是精细纯化,成本也高很多. 我到更觉得用分子筛即Size Exclusion更能够的达到目的.不过需要注意的是,这样的花费可能要大很多.
最简便的办法是,要是小肽耐热,用加热去除大蛋白,可能是最简单最经济的办法.