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标题:【讨论帖】生物制药产业化及膜分离技术，下游纯化

阿司匹林[使用道具]
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发表于 2013-4-25 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在我对超滤充满了期望，但是昨天问了一下，听说装在超滤器上的那种超滤膜很贵，所以想买个离心超滤管算了，不知到能不能解决问题呢？
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2013-4-25 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的师兄刚刚又告诉我说那种离心超滤管只能用于浓缩 脱盐 对于分离它很差 不好用。
所以现在不知道还有什么又简单、方便，又比较便宜的方法可以处理我做液相之前的样品了
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2013-4-25 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是用离心管还是稍大些的超滤器，取决于您的量和目的。对于很小量，比如几毫升，那只能用离心管，适当操作也可以达到您的目的。而要是用大的膜，面积50cm2，需要的量大约10~几十毫升。该膜价格大约1600~1800RMB。
别着急，有问题，我们可以交流。好事多磨！
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发表于 2013-4-25 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问前辈，能用SDS-PAGE检测分子量为3500Da的蛋白吗？如果可以的话，应该如何配胶呢？我想对发酵液中的NISIN检测和定量，这么做能作到吗？期待回复！

====================================================

可以检测的，用Tricine胶就可以了，专门用来跑小肽的。
我的电脑出问题了，现在用的是别人的电脑，所以不能把配方给你。
自己找找看吧，配方很多地方都有的
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发表于 2013-4-25 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上说的对，我上文所说的就是用Tricine作为配胶成分。
需要提醒的是，我文中描述的问题仍旧存在。就是小分子多肽的扩散问题。
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发表于 2013-4-25 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教前辈，
一般的折叠膜滤器，亲水纤维素过滤蛋白溶液（浓度较高，应该吸附损失不会很大）

一般的收率应该在多少？
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发表于 2013-4-25 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您的分析很有道理。
这就需要我们做一些实验来考虑用什么样的膜，以及多大的膜来做。
高浓度蛋白过滤时候的吸附往往要比低浓度蛋白过滤时候的吸附要高。不是说到了饱和就不在吸附了。尤其在堵塞的情况下，就更没法估计损失了！所以过滤时候的膜选择，包括面积，材质，过滤时候压力差，都需要考虑。
另外纤维素膜对蛋白的吸附，可能比较大。最好用改性很好的PVDF，一定会好。

另外，建议过滤前用您的缓冲体系润湿您的过滤膜。
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发表于 2013-4-25 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Pall 有这方面的产品么？
因为我的体积不是很大，希望滤芯的死体积不要太大。
PVDF是不错，想知道价格，还有，能不能灭菌重复使用。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-4-25 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主你好！
适才看了二位的高见，很是受益匪浅，我现在刚开始做纯化，想用膜分离技术，但是我们实验室只有一套溶剂过滤器，用的是0.45和0.22的膜，是用来过滤上HPLC的流动相的，我在想有没有一种可以和溶剂过滤器兼容的膜可以用来分离蛋白。我知道这个想法可能很幼稚，而且两位提到的膜肯定需要特殊的装置，但是我是刚接触这一方面，所以希望楼主不要见笑！如果能有这方面的资料让我看看，那更是感激不尽了！
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发表于 2013-4-25 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超滤现在的发展很快，既可以脱盐，可以浓缩，可以置换缓冲体系，也可以纯化。

但是孔径和膜的选择很重要，要高精度的截流，要绝对的低吸附

最近在做超滤，用的是 millipore的超滤系统，想问个问题
pes和纤维素的膜，物理强度，哪个好？？？？
看过millipore的介绍，化学稳定性是差不多的。

另外说一下，去内毒素的方法，除了活性炭，膜过滤，还有亲和层析的方法，效果也不错的。

说到扩张床amersham streamline，没有宣传的那么好，实际使用起来，效果并不理想，主要是回收率和清洗重复性，尤其是对于样品组分复杂的。

至于羟基磷灰石，现在是Bio-rad公司主推的产品，它其实是HIC和IEC的结合，可以用来纯化很多东西
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