生物制药

楼主你好！
适才看了二位的高见，很是受益匪浅，我现在刚开始做纯化，想用膜分离技术，但是我们实验室只有一套溶剂过滤器，用的是0.45和0.22的膜，是用来过滤上HPLC的流动相的，我在想有没有一种可以和溶剂过滤器兼容的膜可以用来分离蛋白。我知道这个想法可能很幼稚，而且两位提到的膜肯定需要特殊的装置，但是我是刚接触这一方面，所以希望楼主不要见笑！如果能有这方面的资料让我看看，那更是感激不尽了！

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你说的溶剂过滤器是抽真空的吧
那只能最大提供 1atm的压差，这样的压力太小，不适于超滤。
即使压差够大，没办法切向流的话，可能效率不会高，很容易形成凝胶层。
好像有那种正压的，是不是要加震动装置才会有改善阿
888君来详细说明一下吧，学习中...

楼主你好！
适才看了二位的高见，很是受益匪浅，我现在刚开始做纯化，想用膜分离技术，但是我们实验室只有一套溶剂过滤器，用的是0.45和0.22的膜，是用来过滤上HPLC的流动相的，我在想有没有一种可以和溶剂过滤器兼容的膜可以用来分离蛋白。我知道这个想法可能很幼稚，而且两位提到的膜肯定需要特殊的装置，但是我是刚接触这一方面，所以希望楼主不要见笑！如果能有这方面的资料让我看看，那更是感激不尽了！

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谢谢您的问题。
首先说明一下，在这里开辟栏目，就是希望大家在这里交流，互相受益，所以请不必拘束，我和这里的朋友诚挚欢迎您来这里做客，任何问题，不管因个人的水平有限而能否给予您满意的答复，我都会尽力的。
下游纯化是很具挑战性也因此是很有意思的一个工作。我喜欢。
您的流动相用该法处理，当然十分正确。至少保证您的填料在流动相洗脱过程中受到的污染减少，增加寿命，减少成本。而且纯化的目标蛋白受到杂质的影响也降低。
您这里用的所谓溶剂过滤器，考虑可能是过滤有机溶剂的膜。在HPLC上用于反相HPLC，过滤甲醇，乙氰的是不是？除此而外，也有过滤水性溶剂的膜，用于处理亲水性流动相的。
用膜来分离蛋白，当然是很好的方法，就是我在前文讨论过的切向流，简称TFF，英文Tangential Flow Filtration。原理是利用膜的孔径大小切分分子量差异比较大的蛋白，同时该方法也可以用于蛋白浓缩，脱盐，更换缓冲体系。实际产品除了膜包，还有中空纤维，震动膜，陶瓷膜等。在全球制药的大规模产业化实现起了决定性的作用。
关于该方面的知识，如果需要，可以私下交流探讨。
再次欢迎！

因为我处理的单个样品量不多，但是不同样品的批次多，所以要求这个膜进行清洗防止交叉污染后，能重复使用，所以需要这个膜物理化学稳定性好一点，简单的说，就是不大容易破

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您大可不必担心。用碱清洗，0，1~0，5M；温度不超过50度，必要时加次氯酸钠，放心吧！——您说的是上文说的超滤膜吧？当然，卷式膜我心里没底。

谢谢楼主赐教！我想如果真的不行的话，那我就只有上sephadex G-50 or 100了，我想再问一下楼主，现在分离蛋白除了那些常规的思路：离子交换柱，G-50等，还有一些什么新的分离思路or技术啊！请问能不能赐教?

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您可以用切向流！
当然层析没有问题，可能价格高一些，操作时间长一些，洗脱出来的体积很大。
整体生产过程：
1，澄清；
2，切向流超滤；——可反复多次，达到浓缩，脱盐，分级分离等
3，层析——多重组合，当然越少步骤越好！降低成本！获得半成品；
4，配制剂型；
5，除菌过滤，罐装，包装。
前3步是纯化方法和思路。有时候需要反复交叉操作。比如上离子交换层析柱前的脱盐就需要用超滤的方法，好极！