蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】有用过Pierce膜蛋白提取试剂盒的群友请进

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标题:【求助】有用过Pierce膜蛋白提取试剂盒的群友请进

lgm[使用道具]
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发表于 2013-4-27 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我知道这个试剂盒的原理了：
在4℃时所有的蛋白质均可都溶于抽提Buffer，但在37℃时，抽提Buffer分为水相和去污相；此时亲水性蛋白溶于水相，疏水的膜蛋白溶于去污剂相中，根椐该性质分离出膜蛋白。
所以，离心之前的温度很重要，而且离心机应该是常温下的。
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发表于 2013-4-27 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我知道这个试剂盒的原理了：
在4℃时所有的蛋白质均可都溶于抽提Buffer，但在37℃时，抽提Buffer分为水相和去污相；此时亲水性蛋白溶于水相，疏水的膜蛋白溶于去污剂相中，根椐该性质分离出膜蛋白。
所以，离心之前的温度很重要，而且离心机应该是常温下的。

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我是在常温下离心的，而且离心之后拿出来一看就是没有分层的。然后我分装了蛋白，用碧云天的BCA试剂盒测蛋白，有蛋白~所以我疑惑的是为什么一点沉淀物都没有的呢……
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lgm[使用道具]
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发表于 2013-4-27 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你做的试剂盒和楼主的不一样吧，那个分层只针对膜蛋白试剂盒，我没看普通蛋白的提取试剂盒
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2013-4-27 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个试剂盒应该就是根据Triton X-114的提取原理来做的吧？我不用试剂盒，自己配试剂来做也做不出来分层，为啥啊？求大虾指点啊！！！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2013-4-27 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用Pierce的 M-PER®Mammalian Protein Extraction Reagent 盒子提总蛋白，按照说明书离心完了之后没看见细胞碎片什么的沉淀，也没见到疏水层和亲水层的分层~液体也不粘稠~用碧云天BCA蛋白测定试剂盒检测，有蛋白存在，请问这样测出来的蛋白准确吗？园里有人用过这个试剂盒吗？ 恳请指教，谢谢~

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你好 我最近也在用这个试剂盒，但是蛋白浓度很低，可以交流交流吗
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3648755[使用道具]
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发表于 2013-4-27 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也正在用Pierce的盒子提膜蛋白 其他都还好 就是觉得浓度有点低 你的疏水相不能直接加Loading,要先用他们盒子里面的试剂B稀释你的膜蛋白样品，然后才能上样，具体步骤：先将试剂B稀释4倍（用双蒸水），然后用稀释的B去稀释你的疏水相样品（稀释2到5倍），最后才加Loading。

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您好！请问您说的这个稀释B液的上样方法您尝试过吗？能看到目的带吗？
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