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提供另外一种方法 ——Triton X-114相分离技术，效果好，成本低。该方法我在多种重组蛋白的规模化生产的过程中实践过，要求是重组蛋白不能过于温度敏感以及高浓度下聚集沉淀。我有一片有关的文章准备发表，以下摘录部分文字内容贴上，但愿杂志编审不视作一稿两投。
在蛋白粗提液中加入1.0% Triton X-114，4℃磁力搅拌1小时，充分混溶；30℃水浴中放置40min，不时搅拌；25℃ 15000g离心15min，小心移出上层水相。
抽提进行两个循环；抽提过程中所用的玻璃器皿220℃烘烤2小时以上，塑料离心管用0.5M的NaOH浸泡1小时然后用三蒸水洗涮干净。
两轮抽提过程中，内毒素含量降低的幅度都在98%以上。这一结果表明，Triton X-114相分离法去除内毒素的效果，显然与蛋白溶液中内毒素的含量、Triton X-114的加入量都有关系。实际上，在本研究进行的过程中，我们也实验证实了在一定的浓度范围内，Triton X-114 的加入量与内毒素的去除效果呈正相关（结果未显示）。我们选择1%的Triton X-114加入量，是基于内毒素去除效果和蛋白回收率两方面的综合考虑。因为在抽提过程中，蛋白溶液的浓度基本不会变化，但蛋白溶液的体积会减少，而且减少的幅度与Triton X-114的加入量成正比。本研究所采用的Triton X-114相分离抽提方法，蛋白收率在85%以上。
两轮抽提过程中，内毒素含量降低的幅度都在98%以上。这一结果表明，Triton X-114相分离法去除内毒素的效果，显然与蛋白溶液中内毒素的含量、Triton X-114的加入量都有关系。实际上，在本研究进行的过程中，我们也实验证实了在一定的浓度范围内，Triton X-114 的加入量与内毒素的去除效果呈正相关（结果未显示）。我们选择1%的Triton X-114加入量，是基于内毒素去除效果和蛋白回收率两方面的综合考虑。因为在抽提过程中，蛋白溶液的浓度基本不会变化，但蛋白溶液的体积会减少，而且减少的幅度与Triton X-114的加入量成正比。本研究所采用的Triton X-114相分离抽提方法，蛋白收率在85%以上。
参 考 文 献
[1] Aida Y, Pabst MJ. Removal of endotoxin from protein solutions by phase separation using Triton X-114. J. Immunol Meth , 1990, 132: 191-195
[2] Liu SG, Tobias R。 Removal of endotoxin from recombinant protein preparations. Clinical Biochem, 1997, 30: 455-463
