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标题:【讨论帖】Blue-Native PAGE(BN-PAGE)技术讨论

ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为链霉菌膜蛋白有点特别，所以我说的杂质是指那些按照你的膜蛋白提取方法提取到膜蛋白后，随着膜蛋白一起沉淀下来，也会溶进你的detergent，再超离也下不来，同时会对你的bn产生影响的物质。
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发表于 2013-5-2 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

下面的图是转二向后做银染得到的,显影稍微显过了.从我的图上来看,点主要集中在胶的上面部分.也就是说我得到的小分子量的蛋白比较少．二向胶用的是10%的Tricine胶．我想请大家帮我分析一下问题出在哪里．谢谢！


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2013-5-2 12:40
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，做Blue-Native PAGE，buffer都不含有SDS，我的蛋白在14－100DK之间，用什么marker呢？
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发表于 2013-5-2 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kuaizige 于 2013-5-2 12:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问，做Blue-Native PAGE，buffer都不含有SDS，我的蛋白在14－100DK之间，用什么marker呢？

你的问题好像不是我们这个专题讨论的话题。
你要问的应该是native-page吧，这里讨论的是blue native-page.
你做native－page，应该没有什么marker这一说，只有把你的蛋白跑sds做比较才能知道分子量。
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发表于 2013-5-2 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你看我的图出现了下面的胶紧缩这种情况，还有就是上面背景很深，是什么原因造成的阿？还有高分子量的蛋白质marker在什么地方买阿？谢谢！


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2013-5-2 12:42
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发表于 2013-5-2 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种紧缩的问题基本是因为你把第一向的胶放入第二向后，然后封胶，如果你用琼脂糖封胶，这样第一向胶左右两头就是琼脂糖，这样整个胶的上下电场强度不一致，当胶走的时候就会出现溴酚蓝走不平的现象，往往会走出一个＂哭脸＂的溴酚蓝，最后会导致胶下面紧缩．解决办法就是跑的时候电压稍小一点，以观察溴酚蓝走平为好．背景很深应该是你银染本身有问题吧．大分子量marker sigma有卖．
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发表于 2013-5-2 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
sigma大分子量marker 的货号是多少？分子量范围在多大阿？
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发表于 2013-5-2 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search/ProductDetail/SIGMA/MWND500')
或者GE的货号17-0445-01
cuturl('http://www1.gelifesciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/Products?OpenDocument&parentid=108791&moduleid=40404&zone=undefined')
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发表于 2013-5-2 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做线粒体bn-page时怎么样才能避免叶绿素的污染阿？含有叶绿素的线粒体会不会也能得到类囊体的蛋白质复合物阿？
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 小中大


QUOTE:
原帖由 memory 于 2013-5-2 12:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

做线粒体bn-page时怎么样才能避免叶绿素的污染阿？含有叶绿素的线粒体会不会也能得到类囊体的蛋白质复合物阿？



那就要看你提到的线粒体的纯度了
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