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标题:【讨论帖】Blue-Native PAGE(BN-PAGE)技术讨论

memory[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ukonptp 于 2013-5-2 12:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



那就要看你提到的线粒体的纯度了

我走胶时用的是17*17cm型号的板，一般用多大的电压才能较好的防止第二向电泳过程中泳道弯曲的情况？我前几天试过100v电压，跑了14个小时才跑完,结果还是出现了这种情况，急啊！！！！
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发表于 2013-5-2 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 memory 于 2013-5-2 12:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


我走胶时用的是17*17cm型号的板，一般用多大的电压才能较好的防止第二向电泳过程中泳道弯曲的情况？我前几天试过100v电压，跑了14个小时才跑完,结果还是出现了这种情况，急啊！！！！ ...


不知道你１７*１７是第一向还是第二向，还是都是．其实没有必要用这么大的槽，不管是第一向还是第二向．泳道弯曲和电压有点关系，但是也不完全是这样的．
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发表于 2013-5-2 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我对BN-PAGE，只是从文献里 知道有这么一回事，但没具体地研究过，看了上面的帖子，我有个想法不知可行吗，希望大家给与指导。我是研究植物雄性不育的，现在对雄性不育的理解大多数认为与线粒体有关，所以我觉得，能否将不育植株和可育植株的线粒体膜蛋白提取出来，跑个BN-PAGE
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个想法可以通过bn来看看，做一个比较的研究，但是bn只能来分析线粒体上那些蛋白复合物以及亚基，这些复合物是不是和你的研究相关，这个还是要通过文献来知道。另外，倒是可以通过普通的2d来看看蛋白表达的差异。
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发表于 2013-5-2 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的，我现在正做2d，只是觉得对bn比较感兴趣，好奇，这样我可以有一个思路
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼主，你看过nature protocol 上Hermann Schägger发的Tricine-SDS-PAGE没？我在这个版快上问了一个问题：第二向胶的下面部分没有很多点．但没有人回答．这几天我反复看了文献，Tricine-SDS-PAGE上有一句话似乎给了我答案．Setting the SDS/neutral detergent ratio to <10 may
result in a surprising result after staining: normally separated, large proteins may
be detected in the upper gel areas, but the lower gel areas may be completely clear　with no small proteins detectable.我第二向平衡SDS的浓度是１％．你平衡时sds的浓度是多少？这句话中所指的neutral detergent 是什么？是第一向处理样品时用的TX-100吗？望赐教．谢谢！
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发表于 2013-5-2 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你是想问单纯的tricine还是bn后tricine,照我的想法,如果你是单纯想看10kd以下的,那可以用tricine,如果小分子量的本身不是很多的话也sds就可以解决问题了.按照文献里的话triton是一种neutral detergent ,但是是不是SDS/neutral detergent ratio to <10 里所说的我就不知道了,因为你的样品虽然用triton处理了,但是跑过bn后triton浓度是多少就不知道了,所以你只有降低平衡时sds的浓度再试试就知道了.
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发表于 2013-5-2 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼主的回复.我是想问bn后跑tricine的情况.Setting the SDS/neutral detergent ratio to <10 may result in a surprising result after staining: normally separated, large proteins may be detected in the upper gel areas, but the lower gel areas may be completely clear　with no small proteins detectable.按照这句话的意思我觉得应该是升高平衡时sds的浓度才可以.文献上一般都是用的1%,但我试了很多次,每次总是下面没点.你觉得呢?
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那你可以试试sds的浓度啊,不过如果是这样的话,你第二向可以直接做一个胶浓度大一点的sds-page,这样就可以确定样品里面有没有小分子量的了.
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发表于 2013-5-2 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚刚做了依次BN-PAGE,未成功.叶绿素在胶的上面下不来,是什么问题啊,谢谢高人指点!!!
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