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标题:【讨论帖】Blue-Native PAGE(BN-PAGE)技术讨论

ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 DONT 于 2013-5-2 12:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我刚刚做了依次BN-PAGE,未成功.叶绿素在胶的上面下不来,是什么问题啊,谢谢高人指点!!!

你最好把你的条件说清楚，这样不好判断。
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DONT[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ukonptp 于 2013-5-2 12:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你最好把你的条件说清楚，这样不好判断。

我用提取缓冲液(400 mM sucrose, 50 mM HEPES-KOH, pH 7.8, 10 mM
NaCl, and 2 mM MgCl)提取的类囊体膜后,用提取缓冲液悬浮,之后没有用330 mM sorbitol and 50 mM BisTris-HCl, pH 7.0 洗涤依次,而直接用 resuspension buffer (20% glycerol and 25 mMBisTris-HCl,pH 7.0)悬浮.DM增溶后上样后发现绿色下不来,一直在加样孔的低部,不知是不是没有洗涤的原因?希望指点!非常感谢!另外,我想请教一下baiy,你那有BN-PAGE做类囊体膜详细的PROTOCOL吗?如果有,能否传我一份,感激不尽!
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的样品应该用洗涤液洗涤后才行，这样就可以替换掉以前缓冲里面的成份，从而以bn的缓冲体系代替。你要的protocol传一份给你，估计你也有，就严格按照这个做就会出来了。
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kswl870[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恳请各位帮帮忙，我最近在做blue-native，在跑二维胶SDS-PAGE时 发现浓缩胶凝的特别不好。具体操作如下：我将一维胶切下来之后，用1%SDS，2.5%巯基乙醇浸泡20min之后，用滤纸吸干剩余溶液，然后将胶条放在玻璃板之间，大约灌浓缩胶的位置，开始灌胶，当浓缩胶将其包埋时发现不凝。是不是残余的巯基乙醇影响的呢。请各位多提宝贵意见。
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DONT[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很高兴,最近的BN及二相SDS-PAGE终于做出来了!非常谢谢楼主！
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发表于 2013-5-2 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有用BN胶做过核复合体的？
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zzzz[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主也来帮我一下啊，做blue-native需要什么特殊的仪器吗？除了做梯度胶的电泳槽不一样外，还有什么啊？英文的protocol上说的仪器设备很多啊，也看不太懂，能给俺简单的介绍一下吗？用中文的啊~~~
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教大家，我现在在做温和电泳，实验的目的是分析施用钼元素对小麦类囊体膜蛋白复合体组分有怎样的影响？那在上样时必需要对照和处理样品的叶绿素含量相同吗
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PINK[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
BN出现波浪形条带是怎么回事啊
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2013-5-2 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看过操作过程，试过一次，简单的用G250+甘油处理后点样。
请问样品处理是不是也配的缓冲液，怎么配的？样品是纯化好的样品，不用再处理了吧
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