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标题:【讨论帖】纯化工艺的放大

ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是指填料的载量
确定载量，也是为了更好的节约成本，因为我们现在的产品附加值并不是特别高，而纯化往往也是成本最重要的部分

老外的确很严谨，曾经听别人说过，老外真的做CIP，用AKTAexplorer，做一百次，然后验证，感觉好奢侈哦，呵呵
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发表于 2013-5-2 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问大生产纯化过程中Tris-Hcl缓冲体系，是不是不能用于制药报药方面。
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Tris-HCl可以用于制药方面，但是最好要根据产品的性质确定是否可以用，因为Tris是多氨基化合物，你至少要保证你的产品不与之反应，并且所用试剂也最好不能与Tris有反应，否则就要有相关物质的检验方法才行。因为Tris是极为常用的缓冲体系，有时这一点就容易被忽略了。而且Tris体系成本要高于磷酸盐缓冲体系，成本也要考虑。

举个不恰当的例子，以前我上学时做酶的固定化，用酶的游离氨基与固定化载体的环氧基反应，但是就是忽略了Tris的反应能力，所以采用了Tris作为缓冲液。结果Tris 与载体反应了很多，酶都没有连接上。换了磷酸盐就好了：）
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Ni-NTA载量要看具体的蛋白,不同的蛋白吸附能力不一样,
纯化工艺设计按Capture, inetermediate purification,polish来设计,具体纯化时候Capture不一定用亲和,挂柱常用离子交换,楼上的举的例子是GE公司抗体药物纯化方法.
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用离子交换是由于参数容易控制PH,离子强度.疏水的参数就比较难控制,样品一变化就难挂上去.
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ffaa[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-2 13:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
用离子交换是由于参数容易控制PH,离子强度.疏水的参数就比较难控制,样品一变化就难挂上去.


疏水层析pH：在pH5-8.5范围内疏水作用没有很大变化，pH<5.0疏水作用增加，pH>8.5疏水作用减弱
如果用上样高盐的buffer去处理样品，我做的大部分为破胞产物，所以在菌体复溶时就用上样buffer，大部分还是挺容易重复的，没遇见你所说的情况。能举例说一下吗？谢谢
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-2 13:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

Ni-NTA载量要看具体的蛋白,不同的蛋白吸附能力不一样,
纯化工艺设计按Capture, inetermediate purification,polish来设计,具体纯化时候Capture不一定用亲和,挂柱常用离子交换,楼上的举的例子是GE公司抗体药物纯化方 ...

同意，一般Capture都不会选择亲和，因为第一步的Capture毕竟杂蛋白还是比较多的


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 小中大

在研发设计过程中，其实经过预装柱对填料的初选后，就要进行一些初步的计算，因为前面我们也说了：对于层析参数的线性放大的一般原则是：
一般从小试到生产固定的参数是：相同线性流速、相同缓冲液、相同填料、相同柱高、相同的样品浓度和pH，相同的样品体积和柱床体积比例，相同梯度体积和柱床体积比例
放大的条件是：柱直径、体积流速，上样流速、上样体积、梯度体积

所以在小规模必须估计你装多高的填料，放大以后使用什么样的柱子能满足你的生产要求
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发表于 2013-5-2 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近也在做蛋白纯化，感觉步骤挺繁琐，而且丢失也比较多，特别是用层析柱的方法，最后得率往往都很低，仅做实验用的蛋白有时候就要做好几次，很费时费力，再大量制备运用到实际（如临床）估计更难。所以，我也同大家一样，觉得纯化工艺要放大！还希望大家多多指教：）
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发表于 2013-5-2 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在AKTA CLUB 交流时有人遇到这问题,具体目标蛋白记不得了,疏水结合的原理比离子交换复杂,不是很容易控制是正常的.

楼上建议你用大柱,不要小家子气一次做一点.
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