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标题:【讨论帖】纯化工艺的放大

ha111[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还是有点麻烦，收率低得很。国内做的厂家都不多。只有二十多家而已。
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位战友说的都很全面。

任何一个药用蛋白的中试生产乃至放大到生产规模，都是以前期实验室规模的小试研发作为基础的。放大的成功与否很大程度上取决于小试的前期研发工作是否扎实，是否经得起推敲。
参数优化和重要参数的验证都非常重要，这根本上决定了工艺是否稳定，从而保证能够生产出质量可靠的产品。
查阅国外的一些资料，看到生产过程中每个操作，乃至每个小的细节都严格的控制各种参数，而每个参数的确定都本着科学性的原则有严谨的数据加以支持，这正是质量合格可靠的必要条件。
中式放大过程要以小试为基础，尽量控制减小与小试试验参数的偏差，这是放大成功的保证。

做一个产品，到了生产规模，优化的工作已经不是最主要的了，更重要的是生产过程的统筹设计，这是个数学问题了。

有关抗体的工艺放大想说几句。
治疗用抗体的剂量在 500~600mg/dose，这样大的剂量使得纯化的概念和目前国内大多数规模的生产有不小的差别。1g 抗体只够两个剂量。柱子规模也会大不少。
亲和层析是最常用的capture步骤，有关脱落配基的问题，GE应该会提供相关文件，一般要求polish后，产品中PrA含量<10ppm。
内毒素的控制非常严格，一般要求<0.1EU/mg，相比1mg/dose （5EU/kg/dose）而言, 内毒素限度要严格N倍。
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发表于 2013-5-2 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看到你在另一个贴子上讲,国内有的厂家都有用1M直径的色谱柱了,这么大的生产规模用的是什么基质的填料,sepharose 还是聚苯乙烯类的? 我看了一些资料,这么大的色谱柱GE和pall有,价钱很高.
要从生产规模上来看,我了解胰岛素的生产,通化东宝的生产规模应该用得上这么大的色谱柱.
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发表于 2013-5-2 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用这么大的大多都是离子交换的填料,而且大多是琼脂糖凝胶的,聚苯乙烯类的对大分子分离纯化还是不成熟.而且生物兼容性不好.
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对蛋白复性的东西比较感兴趣，请教ha111战友，你是否听说过百克级以上的层析复性？如果有，是那个公司？什么产品？用的是什么柱子呢？入行尚短，望指教。
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看到你在另一个贴子上讲,国内有的厂家都有用1M直径的色谱柱了,这么大的生产规模用的是什么基质的填料,sepharose 还是聚苯乙烯类的? 我看了一些资料,这么大的色谱柱GE和pall有,价钱很高.
要从生产规模上来看,我了解胰岛素的生产,通化东宝的生产规模应该用得上这么大的色谱柱.

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是GE的填料，产品附加值高，就用的起，呵呵
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这段时间开始做纯化的放大，因为发酵优化产品的表达量有了很大的提高（5倍以上的提高），今天用以前的纯化工艺（摇瓶发酵）做就发现有很大的差异，具体的结果我还得去分析，但是终于深刻体会到以前前辈告诉我的“必须等发酵工艺成熟以后再去确定最终纯化工艺”的道理
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发表于 2013-5-2 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 KGZ564 于 2013-5-2 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
对蛋白复性的东西比较感兴趣，请教ha111战友，你是否听说过百克级以上的层析复性？如果有，是那个公司？什么产品？用的是什么柱子呢？入行尚短，望指教。 ...

百克级的复性规模真没听说过，这个难度实在太大了，恐怕世界上的公司很少这样做。不过克级规模的复性是有的，当然这个是指蛋白的含量，而不是包涵体的含量。
而且目前复性工艺最成熟和稳定的还是稀释复性和透析复性，层析复性并不怎么实用。如果实验室规模的工艺探索，能选用的凝胶产品无非就是那几家公司，GE，pall，等等
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ha111[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ffaa 于 2013-5-2 13:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这段时间开始做纯化的放大，因为发酵优化产品的表达量有了很大的提高（5倍以上的提高），今天用以前的纯化工艺（摇瓶发酵）做就发现有很大的差异，具体的结果我还得去分析，但是终于深刻体会到以前前辈告诉我的“必须等发酵工艺成熟 ...

我个人觉得这个问题可能出在发酵和纯化中间预处理过程。不论发酵工艺如何，是采用flask还是fermentor，产物的性质/含量有一定差别，但是对纯化来说，包涵体或上清液的预处理更加关键。对于大肠杆菌表达来说，发酵罐一般用来制备包涵体，因此它的破菌/洗涤制备条件需要适当摸索，然后裂解复性。如果制备的是周质表达的上清，破菌抽提条件是很关键的。
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-2 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没做过层析蛋白质复性，但是上次听了苏志国老师的一堂课，他们现在在做多梯度层析法重折叠蛋白质，就是在层析柱上形成浓度梯度，然后复性。
我看了一下，可逆吸附（疏水、亲和、离子交换）的回收率还行，可逆吸附
对于放大还是可行性大一些，不知道可以可以，大家可以谈论一下。
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