小中大
本来我很有些反对那个年终排名的,没想到能把楼主引出来开这个帖子,有幸!
关于抗体纯化,看起来很简单,protocol一堆一堆的,当然,如果只是纯化一点少量抗体做试验室的试验用,抗体纯化很简单。
但实际上做过几十个或上百个以上抗体纯化的老手就会知道,抗体纯化不简单!甚至比那些大肠杆菌表达的重组蛋白要难。做商品化应用的抗体纯化同行们也有此体会吧?
难有几个方面。
例如原料的差异。无论是单抗腹水还是多抗血清,不能保证每批原料的相同,有时候甚至差异很大。当一批纯化抗体出现问题时,是原料原因引起还是纯化过程引起的排查就很有得受。而重组的E.Coli.或酵母蛋白相对要均一性的多。
例如抗体活性的保持。对重组E.Coli.或酵母蛋白,如果是可溶蛋白,其活性往往较稳定,只要不降解,变化不大。而抗体却表现的很微妙。缓冲液、温度或纯化用柱的细微变化往往会带来差异较大的结果。
非常高兴楼主开这个帖子。我先来问一个问题。
在单抗腹水前处理过程中,由于免疫方式的不同,有些腹水往往含有较多的石蜡油,造成过滤困难,而且会堵纯化的在线过滤器和柱头,也会粘附在纯化胶上,如何通过前处理过程去除呢?希望对抗体的损失不大。