蛋白质与蛋白组学

我想进行抗原纯化，这种抗原是位于肝脏组织中，分子量为57KD，想请问下，该怎么纯化？如何选择纯化方式？谢谢了！

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首先要搞明白该抗原的具体理化性质，然后对组织匀浆，用缓冲盐粗提，对粗提液检测，一定要建立起检测目标物的准确方法，后面高纯度的提取就要选择层析方法了

用Protein A从血清中提取抗体，上柱前如何对血清进行处理？盐析？直接稀释？请指教。

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盐析和直接稀释都可以

你好，我现在需要从血清中纯化一点多抗，然后将这多抗偶联到NHS活化基质上。我做过一次抗体纯化，但纯化后的抗体失活了，找不到什么原因。麻烦楼主帮忙看看

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用的是proteinA的柱子，2ml兔血清用pbs稀释了10倍，缓冲液是pbs，pH7.4，洗脱液是0.1M柠檬酸缓冲液pH4.0，由于多抗是要偶联NHS的，不能够有氨基，我就没有用tris缓冲液中和，用的是0.5M的 磷酸氢二钠，pH9.1吧。结果纯化后测定多抗效价就1：1600才 OD 0.3，血清里面的效价是1：10000 OD0.7，基本上完全失活了。不知道什么原因。

你好，我现在需要从血清中纯化一点多抗，然后将这多抗偶联到NHS活化基质上。我做过一次抗体纯化，但纯化后的抗体失活了，找不到什么原因。麻烦楼主帮忙看看

用的是proteinA的柱子，2ml兔血清用pbs稀释了10倍，缓冲液是pbs，pH7.4，洗脱液是0.1M柠檬酸缓冲液pH4.0，由于多抗是要偶联NHS的，不能够有氨基，我就没有用tris缓冲液中和，用的是0.5M的 磷酸氢二钠，pH9.1吧。结果纯化后测定多抗效价就1：1600才 OD 0.3，血清里面的效价是1：10000 OD0.7，基本上完全失活了。不知道什么原因。

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你要做抗体偶联然后免疫反亲和抗原蛋白，偶联上去的抗体必须是特异性的，不能是proteinA纯化下来的总IgG

你好，我现在需要从血清中纯化一点多抗，然后将这多抗偶联到NHS活化基质上。我做过一次抗体纯化，但纯化后的抗体失活了，找不到什么原因。麻烦楼主帮忙看看

用的是proteinA的柱子，2ml兔血清用pbs稀释了10倍，缓冲液是pbs，pH7.4，洗脱液是0.1M柠檬酸缓冲液pH4.0，由于多抗是要偶联NHS的，不能够有氨基，我就没有用tris缓冲液中和，用的是0.5M的 磷酸氢二钠，pH9.1吧。结果纯化后测定多抗效价就1：1600才 OD 0.3，血清里面的效价是1：10000 OD0.7，基本上完全失活了。不知道什么原因。

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测定一下柱穿透液的效价，看看是否一定是抗体失活还是活性抗体没有好好吸附。

tris中和后可以透析除去，对偶联没有影响。