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标题:【讨论帖】抗体纯化及相关应用实验技术讨论帖

蒜泥面条[使用道具]
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抗体浓度大但不一定活性高啊,在公司我是专门负责抗体纯化的,一般同时纯化几种腹水,当然腹水WB都是合格后才纯化的,纯化后的抗体有的做WB效果是比腹水效果好,但有些确不如腹水,所以我们公司有些抗体也只能以腹水的形式卖了,谢谢你的回答,我也会做相关原因的排除,再次感谢
"抗体浓度大但不一定活性高啊"

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理论上同一个特异性抗体的浓度和活性成正比,这是定律,如果事实不是这样,那肯定是实验有问题了

建议把上柱前的腹水原液,过柱后的流穿液,纯化出的抗体,阴性,阳性对照,这些排在一起做WB和ELISA

比对结果后就比较分析
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daod[使用道具]
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你好。有个问题请教:
单抗经过胃蛋白酶酶切后,产物经非还原SDS-PAGE如下:

左边三个孔分别是不同的上样浓度,左边最高,依次递减,MARKER在最右边,分子量已在图上标出。
我的目标物是110kd左右的F(ab)2片断,但还有很多其他的杂带(70多kd,50kd左右,40kd左右),用分子筛(sephadex G-200)可以吗?可否推荐一个适用的纯化分离的方法?谢谢!

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Phenyl 疏水是通用方法
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kuohao17[使用道具]
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最近要做抗原亲和纯化,请问蒜泥兄有相关资料吗?主要是关于如何将抗原偶联到树脂的相关资料
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ladyhuahua[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 kuohao17 于 2013-5-10 13:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
最近要做抗原亲和纯化,请问蒜泥兄有相关资料吗?主要是关于如何将抗原偶联到树脂的相关资料

建议使用NHS偶联,条件温和,相比溴化氰活化,NHS形成的化学键稳定性更好,同时避免非特异离子作用。
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蒜泥面条[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 kuohao17 于 2013-5-10 13:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
最近要做抗原亲和纯化,请问蒜泥兄有相关资料吗?主要是关于如何将抗原偶联到树脂的相关资料

NHS 环氧活化的填料 都可以使用

具体还是要看你的抗原的属性
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上海丰核[使用道具]
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回复 #1 蒜泥面条 的帖子

抗体纯化方面,看来楼主经验很丰富!
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