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标题:【讨论帖】抗体纯化及相关应用实验技术讨论帖

蒜泥面条[使用道具]
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发表于 2013-5-8 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pH测过没？

可以稍微调整一下pH

不过我还是建议你换超滤吧

透析时间长，抗体失活和聚集的几率都高
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ha111[使用道具]
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发表于 2013-5-8 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在正准备做重组蛋白去除内毒素方面的工作，看了一些相关资料，可还是一头雾水，如果哪位前辈有这方面的经验，望不吝赐教，万分感谢！也感谢楼主开这样一个帖子，给大家提供一个学习的平台。
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发表于 2013-5-8 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ha111 于 2013-5-8 15:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我现在正准备做重组蛋白去除内毒素方面的工作，看了一些相关资料，可还是一头雾水，如果哪位前辈有这方面的经验，望不吝赐教，万分感谢！也感谢楼主开这样一个帖子，给大家提供一个学习的平台。 ...

你是大肠杆菌表达还是真核细胞表达？
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ha111[使用道具]
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发表于 2013-5-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 蒜泥面条 于 2013-5-8 15:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你是大肠杆菌表达还是真核细胞表达？

是大肠杆菌表达的带有His标签的一种蛋白
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发表于 2013-5-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大肠杆菌的重组蛋白要去内毒素达标那是相当麻烦滴了

你镍柱下来后的样品内毒素检过没？在多少EU/ML的水平？

后期要去除高含量的内毒素，不是那么容易的，当初制定的工艺路线就有问题。

应该选择用细胞真核表达，全程控制内毒素的水平
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发表于 2013-5-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 蒜泥面条 于 2013-5-8 16:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
大肠杆菌的重组蛋白要去内毒素达标那是相当麻烦滴了

你镍柱下来后的样品内毒素检过没？在多少EU/ML的水平？

后期要去除高含量的内毒素，不是那么容易的，当初制定的工艺路线就有问题。

应该选择用细胞真核表达，全程控制内 ...

还没有检测过内毒素的含量，打算去除内毒素后再用鲎试剂检测。看来要麻烦大了，蛋白是用于动物实验的，内毒素必须得去除的。您还有什么高招吗？
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发表于 2013-5-8 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 ha111 于 2013-5-8 16:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


还没有检测过内毒素的含量，打算去除内毒素后再用鲎试剂检测。看来要麻烦大了，蛋白是用于动物实验的，内毒素必须得去除的。您还有什么高招吗？ ...

去内毒素没有高招

疏水，离子交换，亲和，一个一个试，样品损失和去除率都是问题

何况你是细菌表达的，最大的内毒素来源就是细菌

哦米托佛，回头是岸
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发表于 2013-5-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #68 蒜泥面条 的帖子

那好，我已近提出一批了，就差去内毒素一步了，只能硬着头皮往下做了。非常感谢！
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发表于 2013-5-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那好，我已近提出一批了，就差去内毒素一步了，只能硬着头皮往下做了。非常感谢！

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如果是碱性蛋白，用阴离子交换柱穿透目标蛋白，可以很好地去除内毒素。
如果是酸性蛋白，很麻烦，要从破菌开始就要进行控制，全程使用注射用水，在无菌环境下进行各步纯化操作等等。
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发表于 2013-5-8 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
他这个案例中，用细菌来表达无热源重组蛋白，本身就不是最佳的路线。

要除干净，达到药典的标准，要花很大的力气，除非运气特别好，摸索到一个很好的条件，样品损失也不多，内毒素还能达标
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