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标题:【求助】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统...

duoduo[使用道具]
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发表于 2013-5-11 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 ffaa 于 2013-5-11 16:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


最好都试一下，还有highfive细胞。哪种好就用哪个来表达，扩增病毒通常用sf9，高效表达通常用highfive。

哦，好的，非常感谢！您有这方面的材料吗，可否给我发一些，我邮箱:dongwuyixue217@163.com,细胞说明书上只说sf9比sf21传的代次低一些，至于在培养病毒和表达蛋白方面的差异没有说！
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-5-11 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 duoduo 于 2013-5-11 16:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


哦，好的，非常感谢！您有这方面的材料吗，可否给我发一些，我邮箱:dongwuyixue217@163.com,细胞说明书上只说sf9比sf21传的代次低一些，至于在培养病毒和表达蛋白方面的差异没有说！ ...

您好，不知道您使用的杆状表达系统是invitrogen还是merk公司的产品？关于产品的说明，官方网站上都有比较详细的资料。如果您还没有开始做，推荐您使用merk公司最新一代的表达载体，个人觉得会比帖子中讨论的invitrogen公司的这套系统要好。

我手头上的一些文献都是针对我所研究的相关病毒蛋白表达情况，可能并不适用于您。

另外想说明的一点，杆状病毒表达系统并不是可以随心所欲的表达目的蛋白，真核表达、可溶解，这些都是建立在对拟表达蛋白所对应的目的基因的了解和改造，包括做一些稀有密码子的优化，基因5‘端二级结构的消除，加上一段促分泌的肽，或者3’段加上一段帮助蛋白折叠的蛋白标签等等。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-5-11 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ffaa 于 2013-5-11 16:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


您好，不知道您使用的杆状表达系统是invitrogen还是merk公司的产品？关于产品的说明，官方网站上都有比较详细的资料。如果您还没有开始做，推荐您使用merk公司最新一代的表达载体，个人觉得会比帖子中讨论的invitrogen公司的 ...

您好！非常感谢您的回复，从您的回复来看您对BEVS表达系统非常熟悉，我们用的是invitrogen公司的表达系统，而且我本人没有做过真核表达载体的构建工作，只是拿别人构建好的载体也就是重组杆毒接种了悬浮培养的sf21细胞，然后得到纯化的目的蛋白，对这个纯化的目的蛋白作为亚单位疫苗的免疫效果进行一系列的评估。不过我对这个系统比较感兴趣，所以想多了解一下。您最后一段讲的我至听说过密码子优化的问题，其他一些基本都没有听过，可能我们做这个东西做个还是少没有考虑过这么复杂的问题！再次感谢您的回复，希望有机会和您多多交流！
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wsll[使用道具]
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发表于 2013-5-11 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位大侠，我目前也在做Bac-to-Bac，一直拯救不出来P1代病毒，希望大侠指点啊。Q
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dalian0725[使用道具]
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发表于 2015-11-20 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 ffaa 的帖子

我想问一下，你说的无添加成分是不是只有Grace粉溶于水中就行，不用添加水解乳蛋白，酵母浸出液，碳酸氢钠？
转染试剂用脂质体转染试剂行吗？
你质粒是用什么方法提取的？
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dalian0725[使用道具]
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发表于 2015-11-20 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #20 jujuba 的帖子

我想问你一下   你手提质粒的方法是什么
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发表于 2015-11-20 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #24 gemei0115 的帖子

我也是手提质粒，但RNA浓度老高了，我想问一下你的具体方法是什么
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发表于 2015-11-20 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #32 mamamiya 的帖子

同学    我想问你一下   你的提取质粒的具体方法和转染方法。
因为我用碱裂解的方法提取杆粒  包括出样口有三四条带   并且在最底下还含有一条特别亮的RNA带，脂质体转染sf9，没啥病变？转染时培养液用Grace培养液（Grace培养液用Grace粉，水解乳蛋白，酵母浸出液，碳酸氢钠来配制），却一直没有病变
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发表于 2015-11-20 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #35 okhaha 的帖子

我现在也在做这方面的，质粒用碱裂解的方法提，但是从上到下有四五条带，包括出样口的带还有最底下应该是RNA 带，脂质体转染sf9培养液用的是Grace（Grace培养液是由Grace粉，水解乳蛋白，酵母浸出液，碳酸氢钠）但是没啥病变。
就想借助于你们的提取质粒和转染的方法来进行实验
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dalian0725[使用道具]
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发表于 2015-11-20 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #84 wsll 的帖子

亲  你现在做出来了吗？我想借助你提取质粒和转染昆虫细胞的方法
因为我是用碱裂解的方法来提取质粒，大概有四五条带，包括出样口有带，最底下有RNA带。通过脂质体转染sf9，培养液用Grace（Gracce培养液由Grace粉，水解乳蛋白，酵母浸出液，碳酸氢钠配制）
但是老失败，所以想问你一下
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