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标题:【专题讨论贴】蛋白质组学研究工作该如何深入?

vvmmoy[使用道具]
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感触颇深,可能还要用生物信息学来进行分析。我的方向也和这很有关,我师兄已纯化几个活性蛋白,未用2D,是HPlC,已送做MS,可能是新的东西,请教各位前辈,我想研究它的晶体结构,可行吗。谢谢!
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土坷垃[使用道具]
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本人是新手,刚刚接触蛋白质组学的东西,想利用蛋白质组的技术寻找到差异蛋白后,确定几个感兴趣的蛋白,在细胞水平做一点功能相关的工作,不知这样的思路可不可行
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skytree[使用道具]
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现在觉得很多搞基因组的不愿意搞蛋白质组,搞蛋白质组的又不愿意搞基因组
很同意tiger22战友的这句话。
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TAT[使用道具]
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本人通过2-DE+MS找出了几个差异蛋白,正准备进一步研究其功能,学习了。
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质谱分析得出的差异蛋白,有已知的,也应该有未知的,然后可以研究未知蛋白的一级结构,再怎样研究其功能呢?请各位赐教!
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QUOTE:
原帖由 TAT 于 2013-5-11 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

本人通过2-DE+MS找出了几个差异蛋白,正准备进一步研究其功能,学习了。

请问下一步怎么研究功能呢?多谢!
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jujuba[使用道具]
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我想请教大家一个问题:想用质谱鉴定某个膜蛋白,如何有效将膜蛋白从细胞膜上裂解下来?如何提高膜蛋白的提取量?

谢谢了
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云端ing[使用道具]
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敬爱的众位前辈们,一直想请教大家:双向电泳的重复性不是很好,大分子蛋白和疏水蛋白很难得到,蛋白显影灵敏度很低均不能体现样品中蛋白含量的真实差异,很多有用的蛋白几乎都不能检测出来(特别是一些重要的修饰和调节蛋白都是极微量的),做双向电泳、质谱工作只能得到那些几乎用处不大的蛋白或已经没有研究价值的蛋白,研究差异蛋白质组学的处理方式就是哪几种,把个植物弄的死去活来,我们做这些费力不讨好的工作目的到底是什么呢?我知道自己很浅薄无知,一直弄不明白这些道理,目前很受打击,很迷茫!请各位前辈们指点迷津吧!谢谢!
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plaa[使用道具]
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相关疾病:

肿瘤

谁说肿瘤都是突变引起的?有几个病人都是天生的有突变致癌基因的?
蛋白组为啥就必须追述到基因组阐明原因的?


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2-D电泳找出差异点,质谱鉴定蛋白,皆针对结果而言。从蛋白质组反推到基因组,找出事物发生的原因应该是面临的主要工作,但现在觉得很多搞基因组的不愿意搞蛋白质组,搞蛋白质组的又不愿意搞基因组,再加上中间又多个表观遗传,所以经常是2头下衔接不上。
如肿瘤,大家知道,皆由突变引起。如果用蛋白质组学方法发现差异点,无外乎要么上调,要么下调,要么丢失,要么多一个或多几个。接下来就要检测RNA水平,那么QRT-PCR就要用上了。如果RNA和蛋白不一致,这就变成个很麻烦的事情。如果一致,那么再找DNA。如果RNA 与DNA不一致,还要分析更多原因。如:NMD以及表观遗传,诸如什么CpG island甲基化,5'UTR和3'UTR等非编码区的突变等等。当然还有蛋白之间和蛋白与DNA间相互作用的问题,这个就更复杂。比如你查到蛋白A的水平有变化,其实是由蛋白B的突变而导致的。还有更多的复杂机制。
反之,基因组学研究经常使用LoH,CGH, FISH等方法来找出差异的等位基因来分析肿瘤的诱因。
总之,我觉得蛋白质组要想发好文章,还是要回到基因水平上来阐明机制和机理。
个人愚见,水平有限。
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plaa[使用道具]
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rt-PCR 如果有仪器算便宜的吧,
有一个哥们发现了差异,一共买了12种一抗,就验证出来了一个,老板说你真幸运....
不过相比较,你如果能买得起质谱,又养得起质谱,买12个抗体也小意思了吧....
不过之后再买几只基因敲除的老鼠,
然后再起早贪黑的克隆出蛋白质,纯化出来,做出结构,
然后再反推这样的结构能够引起那些相互作用的蛋白质的调控!
恩,然后你就可以去投science了,或者发现你开始发现的差异压根就不靠谱,或者十年以后被别人证明你的东西是错误的,不过这个时候也基本快退休了,或者成为院士但是又弄了一身负面新闻....
恩,这就是做生命科学的人的一种命运

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做完了银染2-D, 做了分析后,找出了差异点,也做了质谱鉴定。现在应该是要做western验证2-D 的结果吧?但是有人说买抗体很贵,应该先用rt-PCR看看是不是真的有差异,然后再买抗体,也就是说2-D结果不一定准确。不知道是不是该这样呢?万一是由于mRNA和蛋白水平表达不同而造成rt-pcr与2-d结果不符?
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