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标题:【分享帖】秀出你的western转膜条件

98776langtao[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：72KD，42KD 和22KD
WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A. 转膜时间: 90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：大鼠PBMC
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：55KD
WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜
转膜方式（恒流）：湿转，转膜时间: 60-90min
设备：“Bio-Rad mini”
建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了
其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实
也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过
一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的
（没有过头）
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49888[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：大于250kD
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A. 转膜时间: 180min
设备：“Bio-Rad ”
建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
附一张图，是用数码相机微距拍的。


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2013-5-16 16:57
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04906[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白来源：白血病细胞
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：28KD
WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜
转膜方式（恒流）：湿转，90min，0.25A
设备：“Bio-Rad ”
建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200KDa
WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：120v 恒压
转膜时间：120 min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad

建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2013-5-16 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：胰腺β细胞
蛋白名称（可保密）：******
蛋白分子量：90-130KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：250mA 恒流
转膜时间：150 min
转膜设备: 湿转
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发表于 2013-5-16 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白来源：原核表达
蛋白名称（可保密）：保密
蛋白分子量：38KD
WB用膜类型、孔径：0.45 NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100V
转膜时间：120min
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pengke1983[使用道具]
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 小中大
蛋白来源：心脏
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：220kDa，130kDa，70kDa,41kDa
WB用膜类型、孔径：PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：70v120min，180min，5-6h
转膜设备:伯乐湿转

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：40kDa一下，70v 60-90min足够，40-70kDa 90-120min即可。
70-120kDa 70v120-180min足够，120-180kDa 180-240min，180kDa以上建议6h
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 小中大
蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：53KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 100min
转膜设备: 湿转 Bio-Rad

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
蛋白来源 卵巢癌膜蛋白
蛋白名称（可保密）：磷酸化VEGFR
蛋白分子量：230
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：80V 120min
转膜设备:湿转 Bio-Rad

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：
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abc816[使用道具]
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发表于 2013-5-16 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白
蛋白名称（可保密）：β-actin
蛋白分子量：42
WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒压
转膜时间：50 4h
转膜设备:湿转 Bio-Rad

图片（可选）：
建议改进方向（可选）：


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